Page 21 - 《中国药房》2024年1期

·药学研究·

梓醇干预PKM2/LDHA表达调控Th17细胞分化的机制研究
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葛 玉 ，陈 雪，王福荣，包宇杰，丁 鹏，周玲玲（南京中医药大学药学院，南京 210023）
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中图分类号 R965；R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）01-0015-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.01.03

摘 要 目的 研究梓醇通过干预丙酮酸激酶M2（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）表达进而影响辅助性T细胞17（Th17）分化的机
制。方法 从C57BL/6小鼠脾脏中分选出naive CD4 T细胞，通过加入定向分化刺激剂诱导72 h使naive CD4 T细胞向Th17细胞
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分化。在诱导分化的同时，分别用0（定向对照）、20、40、80 μg/mL梓醇对细胞进行处理。采用流式细胞术检测细胞中Th17细胞
分化比例，采用比色法检测细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平，采用实时荧光定量-逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测细
胞中视黄酸相关孤儿受体γt（RORγt）、PKM2、LDHA mRNA表达情况，采用Western blot法检测细胞中PKM2、LDHA、信号转导和
转录激活因子 3（STAT3）、磷酸化 STAT3（p-STAT3）蛋白表达情况。结果 与定向对照组比较，经 20、40、80 μg/mL 梓醇作用 72 h
后，细胞中 Th17 细胞分化比例分别降低了 6.74%、8.41%、9.24%；细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平，细胞中 PKM2、LDHA、
RORγt mRNA表达水平以及细胞中PKM2、LDHA蛋白表达水平和STAT3磷酸化水平均显著降低（P＜0.05）。结论 梓醇可通过
下调PKM2、LDHA表达来降低糖酵解水平，进而抑制Th17细胞分化。
关键词 梓醇；糖酵解；辅助性T细胞17；丙酮酸激酶M2；乳酸脱氢酶A

Mechanism of catalpol regulating Th17 cell differentiation by interfering PKM2/LDHA expression
GE Yu，CHEN Xue，WANG Furong，BAO Yujie，DING Peng，ZHOU Lingling（School of Pharmacy， Nanjing
University of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210023， China）

ABSTRACT OBJECTIVE To investigate the mechanism of catalpol affecting the differentiation of helper T cell 17 （Th17） by
interfering the expressions of pyruvate kinase M2 （PKM2） and lactate dehydrogenase A （LDHA）. METHODS The naive CD4 T
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cells were selected from the spleen of C57BL/6 mice， and were differentiated into Th17 cells by adding directional differentiation
stimulants for 72 hours. At the same time， the cells were treated with 0 （directed control）， 20， 40 and 80 μg/mL catalpol. The
flow cytometry was used to detect the proportion of Th17 cell differentiation in cells； the colorimetric method was adopted to detect
the levels of pyruvate and lactate in cell culture supernatant； mRNA expressions of retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t
（RORγt）， PKM2 and LDHA were detected by qRT-PCR method； Western blot was used to detect the expression levels of PKM2，
LDHA， signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3）， and phosphorylated STAT3 （p-STAT3） proteins in cells.
RESULTS Compared with the directed control group， after 72 hours of treatment with 20， 40， 80 μg/mL catalpol， the
differentiation ratio of Th17 cells were decreased by 6.74%， 8.41%， 9.24%， and the levels of pyruvate and lactate in the cell
culture supernatant， the mRNA expressions of PKM2， LDHA and RORγt as well as the protein expressions of PKM2 and LDHA
and the phosphorylation of STAT3 were significantly reduced （P＜0.05）. CONCLUSIONS Catalpol can reduce the glycolysis level
by down-regulating the expressions of PKM2 and LDHA， thereby inhibiting the differentiation of Th17 cells.
KEYWORDS catalpol； glycolysis； helper T cell 17； pyruvate kinase M2； lactate dehydrogenase A

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以 节外表现，多发于女性，在中国大陆地区的发病率为
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关节滑膜炎症为主的慢性自身免疫性疾病，也可伴有关 0.42% 。至今，RA的病因尚未完全阐明，其病理机制仍
在 深 入 研 究 中 。 辅 助 性 T 细 胞 17（helper T cell 17，
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Δ 基金项目 国家自然科学基金面上项目（No.82174306） Th17）是 CD4 T 细胞的主要亚群之一，可介导组织和器
＊第一作者 硕士研究生。研究方向：免疫药理学。E-mail： [2]
官的慢性炎症和继发性衰竭 。研究显示，Th17细胞会
2380189936@qq.com
通过分泌炎症因子[如白细胞介素 17A（interleukin-17A,
# 通信作者 教授，博士生导师，博士。研究方向：免疫药理学、中
药药理学。电话：025-5811933。E-mail：llzhou74@163.com IL-17A）]加剧炎症反应，其过度分化会促进多种慢性炎

中国药房 2024年第35卷第1期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 1 · 15 ·