Page 39 - 《中国药房》2023年23期
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interleukin-6 （IL-6）， IL-1β and tumor necrosis factor-α （TNF-α） and the levels of IL-6， IL-1β and TNF-α mRNA expression in
          liver  tissue  were  detected.  Fecal  samples  underwent  16S  rDNA  sequencing  analysis，  and  the  effects  of  ISL  on  gut  microbiota
          structure  of  mice  were  investigated. The  expressions  of  gut  mucosal  barrier-related  proteins （Claudin-4，  Occludin  and  ZO-1）  were
          determined in the colon tissue of mice. RESULTS Compared with model group， the body weight， liver index， the levels of TC in
          liver  tissue  and  serum，  the  levels  of  AST  and  ALT  in  serum，  the  levels  of  IL-6，  IL-1β  and  TNF-α  in  serum，  and  the  mRNA
          expression of TNF-α in liver tissue were all decreased significantly in ISL group， while brown fat index was increased significantly.
          The inflammation and damage of liver tissue were significantly improved， and the NAFLD activity score and the proportion of lipid
          staining  area  were  significantly  reduced （P＜0.05）.  ISL  could  significantly  up-regulate  the  relative  abundance  of  beneficial
          microbiota （norank_f_Muribaculaceae，  Odoribacter，  Ruminiclostridium，  etc.）  and  the  expressions  of  intestinal  barrier  function-
          related  proteins，  but  could  significantly  down-regulate  the  relative  abundance  of  harmful  bacteria  （Desulfovibrio，
          norank_f_Lachnospiraceae，  unclassified_p_Firmicutes） ，  and  could  repair  intestinal  barrier.  CONCLUSIONS  ISL  could
          significantly  delay  the  progress  of  NAFLD，  the  mechanism  of  which  may  be  associated  with  regulating  gut  microbiota  and
          improving gut barrier function.
          KEYWORDS    isoliquiritigenin； gut microbiota； gut mucosal barrier； non-alcoholic fatty liver disease



              非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病（non-alcoholic  fatty  liver    EG1150H+C型组织包埋机（德国Leica公司），QuantStu‐
                                                                TM
          disease，NAFLD）以过量饮酒以外的原因引起的肝脏甘                     dio  3 型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国
          油三酯（triglyceride，TG）水平升高为特征，影响着全球                  Thermo Fisher Scientific 公司），QuantiFluor -ST 型蓝色
                                                                                                  TM
          25% 的成年人；NAFLD 具有很高的肝脏相关代谢合并                       荧光定量系统（美国 Promega 公司），K5800/C/H/T 型超
                                                       [1]
          症的发病率，给医疗卫生系统带来了越来越大的压力 。                          微量分光光度计（北京凯奥科技发展公司）等。
          NAFLD 的治疗选择非常有限，目前首选的治疗方法仍                         1.2 主要药品与试剂
          然是运动和改善饮食，尚无批准上市的 NAFLD 治疗药                            异甘草素（批号 I111283，纯度 99%）购自上海阿拉
          物，因此，开发安全低毒且药效确切的治疗药物迫在眉                           丁生化科技有限公司；BCA 蛋白检测试剂盒（批号
          睫。NAFLD 发病机制复杂，可能涉及多种代谢和免疫                         P0010）购自上海碧云天生物技术有限公司；增强化学发
          因素，最近的研究表明，肠道菌群在NAFLD的发生发展                         光（ECL）试剂盒、兔源闭合蛋白 4（Claudin-4）单克隆抗
                            [2]
          中扮演着重要的角色 ，肠道菌群可通过影响肠道代谢                           体、兔源闭合蛋白（Occludin）单克隆抗体（批号分别为
              [3]
          产物 、改变肠黏膜屏障通透性、增加菌群易位等方式影                          KF8001、ab210796、ab216327）均购自英国 Abcam 公司；
          响肝脏疾病进程。NAFLD的严重程度与肠道生态和共                          鼠源β-actin单克隆抗体（批号T0022）购自江苏亲科生物
                                [4]
          生细菌代谢功能失调有关 ，因此，肠道微生物群的调节                          研究中心；兔源紧密连接蛋白1（ZO-1）多克隆抗体（批号
          可作为改善NAFLD的有效策略。                                   21773-1-AP）购自武汉三鹰生物技术有限公司；辣根过
              异甘草素是一种从中药甘草 Glycyrrhiza uralensis             氧化物酶标记的羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）、辣根过氧
          Fisch. 根和根茎中分离得到的天然类黄酮，可通过调节                       化 物 酶 标 记 的 羊 抗 小 鼠 IgG（批 号 分 别 为 BA1054、
          肝细胞脂质代谢、降低炎症反应等病理情况发挥改善                            BA1050）均购自武汉博士德生物工程有限公司；丙氨酸
                       [5]
          NAFLD的作用 ，且有效剂量下的异甘草素在体内外对                         转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）试剂盒、天冬氨
          正常细胞的毒性作用非常小 ，具有开发成NAFLD治疗                         酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）试剂盒、总胆
                                  [6]
          药物的潜在价值。有研究表明，异甘草素可通过调节肠                           固醇（total cholesterol，TC）测定试剂盒和TG测定试剂盒
                                                   [7]
          道菌群结构来降低结肠炎相关直肠癌的发病率 ，但其                          （批号分别为 C009-2-1、C010-2-1、A111-1-1、A110-1-1）
          对 NAFLD 小鼠肠道菌群的调节作用及其治疗 NAFLD                      均购自南京建成生物工程研究所有限公司；白细胞介素
          的关系尚未完全阐明。基于此，本研究拟以高脂饮食                            6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子α（tumor ne‐
         （high-fat diet，HFD）诱导NAFLD小鼠模型，通过探讨异                crosis factor-α，TNF-α）的酶联免疫吸附测定（ELISA）试
          甘草素对NAFLD模型小鼠肠道菌群和肠屏障功能的调                          剂盒均购自深圳欣博盛生物科技有限公司。
          控作用，阐明其改善NAFLD的作用机制。                               1.3 实验动物和饲料
          1 材料                                                   本研究所用 6 周龄雄性 C57BL/6J 小鼠由广东省医
          1.1 主要仪器                                           学实验动物中心提供，体重 18～20 g，动物生产许可证
              本研究所用主要仪器有ChemiDoc MP型成像系统、                    号为 SCXK（粤）2018-0002。将小鼠饲养在 SPF 实验室
          PowerPac  Basic 型 电 泳 系 统（美 国 Bio-Rad 公 司），        中，环境温度为（25±2） ℃，湿度为 50%～75%，在光照


          中国药房  2023年第34卷第23期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 23    · 2849 ·
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