Page 36 - 《中国药房》2023年23期

为 C＞B＞A，且 A1＞A2＞A3，B3＞B1＞B2，C2＞C3＞ 标志性成分，相关研究表明其有调节炎症和氧化应激的
[13]
C1。方差分析表见表4，结果显示，A、B、C三个因素对结 作用 ，并能抑制活性氧介导的核因子κB信号通路减轻
果并无显著性影响，根据直观分析表与方差分析表的综 实验性骨关节炎相关的软骨退变 ；马钱子是方中唯一
[14]
合结果，最终选择A1、B3、C2作为提取的最佳条件，即适 的毒性药物，主要成分士的宁与马钱子碱在治疗 KOA
量三色散细粉加8倍量55%乙醇，加热回流提取90 min， 上已有广泛应用 [15―16] 。上述成分含量同时也是凝胶贴
提取2次。 膏后续毒理学实验质量标准需关注的部分。综上，最终
表2 工艺优化的正交试验水平因素表 选择此 3 种成分作为本研究及制剂后续研究的考察
水平 A/倍 B/min C/次 指标。
1 8 40 1 本实验通过加热回流提取的方式除去三色散药材
2 10 60 2
3 12 90 3 颗粒中的杂质，对比水提组、醇提组与传统工艺组大鼠
表3 工艺优化的正交试验设计及正交试验直观分析表 的镇痛行为学实验结果与疼痛介质 CGRP、COX-2、SP、
序号 A B C D（误差） X Y Z 综合评分 PGE2 含量结果，确定乙醇提取所制三色散凝胶贴膏的
试验1 1 1 1 1 0.005 0.192 0.087 0.604 镇痛效果最佳；对比水提组、醇提组与传统工艺组大鼠
试验2 1 2 2 2 0.006 0.185 0.082 0.375 的滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管入侵程度与滑膜
试验3 1 3 3 3 0.007 0.200 0.086 0.792
试验4 2 1 2 3 0.007 0.211 0.075 0.792 组织中 IL-1β、TNF-α、IL-6 蛋白与 mRNA 表达水平检测
试验5 2 2 3 1 0.007 0.196 0.080 0.583 结果，确定乙醇提取所制三色散凝胶贴膏抗炎效果最
试验6 2 3 1 2 0.006 0.185 0.072 0.167
试验7 3 1 3 2 0.005 0.173 0.077 0.000 佳，故选择醇提为最佳提取方式。依据前期单因素实验
试验8 3 2 1 3 0.006 0.184 0.081 0.333 结果，确定使用三色散细粉（300 目）和 55% 乙醇进行正
试验9 3 3 2 1 0.007 0.209 0.087 1.000 交试验，对加醇倍数、提取时间和提取次数进行考察。
K1 0.590 0.465 0.368 0.290
K2 0.514 0.431 0.722 0.181 正交试验结果显示，3 个自变量对试验结果均无显著性
K3 0.444 0.653 0.458 0.639 影响，推测主要是由于提取方式对成分含量的影响较
极差 0.146 0.222 0.354 0.458
大，而提取条件更多的是为后续质控提供一个稳定的标
表4 工艺优化的正交试验方差分析表
准。最后通过正交试验筛选得到三色散提取的最佳工
因素 Ⅲ类平方和 自由度 均方差 F 显著性 艺为适量三色散细粉加8倍量55%乙醇，加热回流提取
A 0.032 2 0.016 0.061 0.942
B 0.086 2 0.043 0.165 0.858 90 min，提取2次。
C 0.203 2 0.102 0.391 0.719 综上所述，本研究优化的三色散原料药提取工艺稳
D（误差） 0.519 2 0.260
R ＝0.382 定、可行，解决了传统工艺药效差、原料药储存麻烦的缺
2
2
调整后R ＝－1.472 陷，筛选得到较佳方案并以此制备凝胶贴膏，为后续制
2.3.2 优化工艺验证 剂的稳定性及安全性评价研究奠定了基础。
按“2.3.1”项下最佳提取条件提取三色散并制备为 参考文献
三色散凝胶贴膏，重复3次，测定得到三色散凝胶贴膏中 [ 1 ] BRANDT K D，RADIN E L，DIEPPE P A，et al. Yet more
的蔓荆子黄素、士的宁和马钱子碱含量平均值分别为 evidence that osteoarthritis is not a cartilage disease[J].
0.007%、0.092%、0.214%，RSD均小于5%，表明优化的三 Ann Rheum Dis，2006，65（10）：1261-1264.
色散提取工艺稳定、可行。 [ 2 ] BIJLSMA J W J，BERENBAUM F，LAFEBER F P J G.
3 讨论 Osteoarthritis：an update with relevance for clinical prac‐
tice[J]. Lancet，2011，377（9783）：2115-2126.
本课题前期研究建立了三色散凝胶贴膏指纹图谱，
[ 3 ] RANNOU F，PELLETIER J P，MARTEL-PELLETIER J.
为三色散凝胶贴膏的制剂开发提供了质量标准 ［12］ 。杨
Efficacy and safety of topical NSAIDs in the management
［8］
楠等 使用三色散药材颗粒制备凝胶贴膏，对三色散凝
of osteoarthritis：evidence from real-life setting trials and
胶贴膏的辅料进行最佳配比的筛选，得到最佳方案后，
surveys[J]. Semin Arthritis Rheum，2016，45（4 Suppl）：
通过药理学实验发现凝胶贴膏抗炎镇痛的活性大于三
S18-S21.
色散传统制法，证明了将三色散贴敷改进为凝胶贴膏剂
[ 4 ] HE W W，KUANG M J，ZHAO J，et al. Efficacy and
具有良好的可行性，凝胶贴膏可作为三色散的改进剂型 safety of intraarticular hyaluronic acid and corticosteroid
进行后续研究。由于组方中所含药材较多，对每个药材 for knee osteoarthritis：a meta-analysis[J]. Int J Surg，
的主要成分都进行测定工作量过大且繁琐，因此，本研 2017，39：95-103.
究选择君药蔓荆子的主要成分蔓荆子黄素作为组方的 [ 5 ] 耿宗洁，冀全博，王岩. 骨关节炎不同治疗方法的研究进

· 2846 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 23 中国药房 2023年第34卷第23期