Page 34 - 《中国药房》2023年23期

2.1.6 大鼠滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管入侵程 5%脱脂奶粉的封闭液，摇床振荡1 h，封闭结束后，洗膜
度的检测 3 次；将膜放入含 IL-1β、TNF-α、IL-6、β-actin 一抗（稀释
取“2.1.4”项下滑膜组织，经石蜡包埋、切片、常规 比均为 1∶500）的平皿中，4 ℃摇床振荡孵育过夜后取
HE染色后，在显微镜下进行观察和拍摄，对滑膜细胞增 出，室温振荡30 min，吸弃一抗，洗膜3次；用5%脱脂奶
殖、炎症细胞浸润、血管入侵程度等情况进行评价。HE 粉封闭液稀释二抗（稀释比为 1∶5 000），室温摇床振荡
染色结果（图3）显示，空白组大鼠滑膜细胞排列整齐，几 反应2 h；二抗反应结束后，回收二抗，洗膜3次。滴加适
乎无炎症细胞浸润；与空白组比较，模型组大鼠滑膜细 量 ECL 工作液进行显色曝光。以目标蛋白与内参蛋白
胞排列紊乱，炎症细胞浸润明显增加，滑膜纤维化加重， （β-actin）的灰度值比值表示目标蛋白的表达水平。统计
胶原沉积增加，可见较多毛细血管增生；与模型组比较， 学方法同“2.1.3”项下。
各给药组大鼠滑膜组织炎症细胞浸润减少，纤维化程度 结果（图4）显示，与空白组比较，模型组大鼠滑膜组
减轻，胶原沉积减少，可见少量毛细血管增生；与传统工 织中 IL-1β、TNF-α、IL-6 蛋白表达水平均显著增加（P＜
艺组比较，醇提组与水提组的大鼠滑膜细胞炎症细胞浸 0.05）；与模型组比较，各给药组大鼠滑膜组织中 IL-1β、
润、滑膜纤维化及胶原沉积进一步减轻；醇提组相较于 TNF-α、IL-6 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）；与传
水提组，大鼠滑膜细胞外表无断裂痕迹，且血管增生与 统工艺组比较，醇提组大鼠滑膜组织中 IL-1β 与 IL-6 蛋
炎症细胞浸润等较少。 白表达水平均显著降低（P＜0.05）；水提组大鼠滑膜组

织中 IL-1β、TNF-α、IL-6 蛋白表达水平与传统工艺组比
较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

IL-1β 31 kDa

TNF-α 17 kDa
100 μm 100 μm
IL-6 21 kDa
A.空白组 B.模型组
β-actin 42 kDa
空白组 模型组 醇提组 传统工艺组 水提组
A.蛋白表达电泳图
2.0
空白组
1.5 a 模型组
蛋白相对表达量 1.0 b b b a b 水提组
醇提组
100 μm 100 μm bc b b a 传统工艺组
C.醇提组 D.传统工艺组 bc b
0.5

0
IL-1β TNF-α IL-6
B.蛋白表达量柱状图（x±s，n＝5）
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与传统工
艺组比较，P＜0.05。
图4 各组大鼠滑膜组织中 IL-1β、TNF-α、IL-6 蛋白表
100 μm
达情况
E.水提组
①：滑膜内衬层厚度；②：滑膜组织下炎症细胞浸润；③：毛细血管 2.1.8 大鼠滑膜组织中 IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA 表达
增生。 水平的检测
图3 各组大鼠滑膜组织的HE染色图
按照Trizol法提取滑膜组织总RNA，将符合标准浓
2.1.7 大鼠滑膜组织中 IL-1β、TNF-α、IL-6 蛋白表达水 度和纯度的 RNA 逆转录为 cDNA。以 cDNA 为模板，
平的检测 β-actin为内参，进行PCR扩增，采用2 －ΔΔCt 法以ABI 7500
取适量滑膜组织匀浆后加入适量的 RIPA 强裂解 v2.0.5 软件计算各目标基因 mRNA 的相对表达量，目标
液，按照 BCA 法测定蛋白浓度，加入 5×蛋白上样缓冲 基因及内参基因序列见表 1。统计学方法同“2.1.3”
液将蛋白煮沸变性，上样电泳，转至PVDF膜上；加入含 项下。

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