Page 33 - 《中国药房》2023年23期
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2 方法与结果                                            表明三色散凝胶贴膏提取工艺改进后对 KOA 大鼠冷、
          2.1 筛选三色散凝胶贴膏原料药的提取方式                              热痛具有良好的缓解作用，可提高疼痛耐受能力；与传
          2.1.1 药物分组及制备                                      统工艺组比较，醇提组与水提组的大鼠热痛阈值均显著
             （1）传统工艺组：按相关专利 所述方法制备凝胶贴                        升高（P＜0.05），表明醇提组与水提组提取物制备的凝
                                     ［9］
          膏。将乙二胺四乙酸、甘羟铝、聚丙烯酸钠加入甘油中，                          胶贴膏对KOA大鼠热痛的缓解作用较传统工艺组凝胶
          在反应釜内搅拌 7 min，作为 A 相；将聚丙烯酸酯、聚丙                     贴膏有改善，而冷痛阈值无显著差异。
          烯酸水溶液、薄荷脑、樟脑、防腐剂和 150 g 三色散粉                               80
                                                                                                  空白组
         （过 800 目筛）加入纯水中，搅拌 10 min，作为 B 相；将酒                                              b       模型组
                                                                     60                 b   b     醇提组
          石酸加入纯水中，超声使其充分溶解，作为C相；将共计                                                               传统工艺组
          1 000 g 的 A、B、C 按约 12∶23∶5 比例相混合，真空搅拌                    t/s  40  bc        a           水提组
          15 min，涂布在背衬层，盖上防黏膜，即得15%载药量的                              20         bc
          凝胶贴膏。                                                            a
             （2）水提组：将过 800 目筛的三色散粉加水浸泡 0.5                           0
                                                                          热痛阈值                       冷痛阈值
          h后加入10倍纯水加热回流提取1 h，过滤后取滤渣按相                           a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与传统工
          同条件重复提取1次，过滤后合并2次滤液，减压浓缩后                          艺组比较，P＜0.05。
                                                                 图1 各组大鼠冷、热痛阈值的测定结果（n＝5）
          按传统工艺组方法制备15%载药量的水提物凝胶贴膏。
             （3）醇提组：将过 800 目筛的三色散粉加水浸泡 0.5                   2.1.4 大鼠取材
          h 后加入 10 倍 75% 乙醇加热回流提取 1 h，过滤后取滤                      在冷热板致痛实验结束后，使用 3% 戊巴比妥钠溶
          渣按相同条件重复提取1次，过滤后合并2次滤液，减压                          液按 2 mL/kg 剂量麻醉大鼠并进行腹主动脉取血，于
          浓缩后按传统工艺组方法制备 15% 载药量的醇提物凝                         4 ℃下按 3 000 r/min 离心 15 min 后，取上层血清，于
          胶贴膏。                                               －80 ℃冻存备用。消毒大鼠膝关节后两侧横向下刀，打
          2.1.2 动物KOA模型的建立、分组及给药                             开关节腔，取滑膜组织于冻存管，置于液氮中，于－80 ℃
              取 20 只大鼠，采用前交叉韧带横断术建立 KOA 模                    冻存备用。
            [10]
          型 ，使用3%戊巴比妥钠溶液按2 mL/kg剂量将大鼠麻                       2.1.5 大鼠血清中疼痛介质 CGRP、COX-2、SP、PGE2
          醉，脱毛备皮并消毒。切开关节囊，打开关节腔后将髌                           含量的检测
          骨内外侧脱位，屈曲膝关节显露前交叉韧带，直视下用                               取“2.1.4”项下血清样品，严格按照ELISA试剂盒说
          手术刀切断，并行抽屉实验确定前交叉韧带是否断裂。                           明书进行操作检测 CGRP、COX-2、SP、PGE2 的含量，于
          止血、髌骨复位并缝合，连续 3 d 肌注青霉素钠以防                         450 nm波长处检测OD值。统计学方法同“2.1.3”项下。
          感染。                                                    结果（图2）显示，与空白组比较，模型组大鼠血清中
              造模成功后，将大鼠分为模型组、醇提组、传统工艺                        CGRP、COX-2、SP、PGE2含量均显著升高（P＜0.05）；与
          组、水提组，每组 5 只。另取 5 只大鼠，不做任何处理作                      模型组比较，各给药组大鼠血清中 CGRP、COX-2、SP、
          为空白组。除了空白组与模型组外，醇提组、传统工艺                           PGE2 含量均显著下降（P＜0.05）；与传统工艺组比较，
          组与水提组于大鼠造模成功后 14 d，参照临床组方按                         醇 提 组 大 鼠 血 清 中 PGE2、COX-2 含 量 均 显 著 下 降
                  2
                              [11]
          0.08 g/cm 剂量分别给药 ，每日1次，连续给药28 d。                  （P＜0.05）。
          2.1.3 冷热板致痛实验                                        250                                   空白组
                                                                                                     模型组
              给药 28 d 后，将 5 组大鼠分别放于（55±0.5）℃与                  200                        a          醇提组
                                                                                                     传统工艺组
         （0±3）℃冷热板仪上，以舔后足作为痛反应指标，记录                           （ ng/L ）  150                          水提组
          其疼痛阈值。采用 SPSS 26.0 软件对数据进行统计分                       含量/              a              b      a  b  b
          析，使用Graphpad Prism v8.0.2.263软件绘图。实验数据               100               b  b  b    bc  b     bc
          以 x±s 表示，多组间比较采用单向或双向方差分析，组                          50    a  b  b  b
          间比较采用Tukey检验。检验水准α＝0.05。                              0
                                                                     CGRP                            SP                             PGE2                        COX-2
              热板法和冷板法的大鼠疼痛阈值变化见图1。与空
                                                                a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与传统工
          白组比较，模型组大鼠的冷痛阈值与热痛阈值均显著下                           艺组比较，P＜0.05。
          降（P＜0.05）；与模型组比较，各给药组大鼠的冷痛阈值                       图2 各组大鼠血清中疼痛介质 CGRP、COX-2、SP、
          和热痛阈值（除传统工艺组外）均显著升高（P＜0.05），                            PGE2含量的检测结果（n＝5）


          中国药房  2023年第34卷第23期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 23    · 2843 ·
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