Page 28 - 《中国药房》2023年23期

2.2.2 RT-qPCR法检测细胞中SREBPs靶基因表达 3.1.2 益肾通络方对db/db小鼠肝组织脂质蓄积及肝脏
将 HepG2 细胞接种于 6 孔培养板内，铺板密度为 系数的影响
3×10 个/孔，置于 CO2培养箱内培养 24 h 后，将细胞分 与 db/m 组比较，db/db 组小鼠肝组织可见大量脂滴
4
为对照组、抑制剂组（SREBPs抑制剂25-HC，10 μmol/L， 聚集，脂滴阳性面积百分比、肝脏系数均显著升高（P＜
浓度依据文献[15]及前期细胞存活实验结果设置）、不同
0.01）。与 db/db 组比较，益肾通络方低、中、高剂量组小
浓度（125、250、500 μg/mL）益肾通络方给药组（根据前
鼠肝组织脂滴阳性面积百分比、肝脏系数均显著降低
期细胞存活实验结果及浓度等比原则，选择此给药浓
（P＜0.01）。结果见图1、表3（因在油红染色过程中有个
度），每组设置 3 个复孔。各组细胞经含药/空白培养基
别样本染色失败，因此样本量为9）。
处理 24 h 后，弃上清。磷酸盐缓冲液（PBS）清洗细胞 3
次，胰酶消化，用 PBS 吹打均匀后转移至 EP 管中，以 表3 各组小鼠肝组织脂滴阳性面积百分比及肝脏系数
1 500 r/min离心5 min，收集细胞。按“2.1.5”项下方法检 测定结果（x±s，n＝9，%%）
测细胞中SREBPs靶基因水平。实验重复3次。 组别 脂滴阳性面积百分比 肝脏系数
2.2.3 Western blot 法检测细胞中SREBP蛋白表达 db/m组 1.03±0.34 4.63±0.02
db/db组 20.22±0.29 a 7.73±0.02 a
细胞按照“2.2.2”项下方法接种、给药培养后，按
益肾通络方低剂量组 11.26±0.37 b 5.32±0.03 b
“2.1.6”项下方法提取细胞总蛋白、定量，取50 μg高温变 益肾通络方中剂量组 9.36±0.29 b 4.49±0.03 b
性的蛋白电泳并测定SREBP蛋白表达。实验重复3次。 益肾通络方高剂量组 4.85±0.35 b 4.43±0.01 b
2.3 统计学方法 a：与db/m组比较，P＜0.01；b：与db/db组比较，P＜0.01。
采用 Graph Pad Prism 6.0 软件对数据进行统计分 3.1.3 益肾通络方对 db/db 小鼠 SREBPs 蛋白表达的
析。定量数据进行正态分布及方差齐性检验，若两者均 影响
满足，计量资料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方 与 db/m 组比较，db/db 组小鼠肝组织中 Pre-SREBP-
差分析，组间两两比较采用 LSD 检验；若不符合正态分
1、n-SREBP-1、Pre-SREBP-2、n-SREBP-2 蛋白表达显著
布，采用Kruskal-Wallis检验；若方差不齐性采用Welch’s
上调（P＜0.05或P＜0.01）；与db/db组比较，益肾通络方
ANOVA检验。检验水准α＝0.05。
各剂量组小鼠肝组织中上述蛋白表达均显著下调（P＜
3 结果
0.05或P＜0.01）。结果见图2、表4。
3.1 体内实验结果
3.1.4 益肾通络方对 db/db 小鼠 Srebp-1c、Srebp-2 及其
3.1.1 益肾通络方对db/db小鼠血脂四项的影响
与 db/m 组比较，db/db 组小鼠血清中 TC、TG、LDL 靶基因表达的影响
水平显著升高（P＜0.01），HDL水平显著降低（P＜0.01）；与 与 db/m 组比较，db/db 组小鼠肝组织中 Srebp-1c 及
db/db 组比较，益肾通络方低、中、高剂量组小鼠血脂四 其下游靶基因 Fasn、Acc1、Scd5、Fads1，Srebp-2 及其下
项均显著逆转（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表2（因db/db 游靶基因Hmgcr、Dhcr24、Insig-1、Fdps的mRNA转录水
小鼠本身有基因缺陷，在生长过程中，模型组有小鼠发 平均显著升高（P＜0.01）；与 db/db 组比较，各给药组小
生严重糖尿病症状，皮肤溃烂死亡，因此样本量为10）。 鼠肝组织中上述基因的 mRNA 转录水平均显著降低
表2 各 组 小 鼠 的 血 脂 四 项 测 定 结 果（x±s，n＝10， （P＜0.01）。结果见表5、表6。
mmol/L） 3.2 体外实验结果
组别 TC TG LDL HDL 3.2.1 细胞中SREBPs蛋白表达检测结果
db/m组 2.51±0.25 0.87±0.42 0.39±0.49 5.04±0.73 与对照组比较，抑制剂组及益肾通络方各浓度组细
db/db组 6.26±0.63 a 1.92±0.38 a 5.98±0.79 a 0.94±0.27 a
益肾通络方低剂量组 4.45±0.24 b 1.56±0.47 c 2.03±0.27 b 1.64±0.27 b 胞中Pre-SREBP-1、n-SREBP-1、Pre-SREBP-2、n-SREBP-
益肾通络方中剂量组 4.67±0.34 c 1.44±0.59 b 1.64±0.14 b 2.67±0.44 b 2蛋白表达均显著下调（P＜0.01），且抑制剂组与益肾通
益肾通络方高剂量组 4.24±0.58 b 1.14±0.64 b 1.09±0.26 b 4.23±0.39 b
络方中、高浓度组上述蛋白表达水平相比差异均无统计
a：与db/m组比较，P＜0.01；b：与db/db组比较，P＜0.01；c：与db/db
组比较，P＜0.05。 学意义（P＞0.05）。结果见图3、表7。

A. db/m组 B. db/db组 C. 益肾通络方低剂量组 D. 益肾通络方中剂量组 E. 益肾通络方高剂量组
图1 各组小鼠肝组织脂质蓄积情况观察结果（油红染色）

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