Page 59 - 《中国药房》2023年22期

inflammatory cell infiltration score was evaluated. RESULTS Compared with the blank control group， the infiltration of
inflammatory cells in the lung tissue of mice was more significant in the asthma group， and there was swelling and shedding of
cells； inflammatory infiltration score， Penh value， the levels of IL-4， IL-13 and TNF-α， the number of EOS， NEU and LYM， the
protein expressions of MCP-1 and CCR2 were increased significantly （P＜0.05）. Compared with the asthma group， the
pathological injuries of the IRN-L group， IRN-H group and positive control group were improved， and the above quantitative
indexes were decreased significantly （P＜0.05）. Compared with the IRN-L group， the above quantitative indexes of the IRN-H
group and positive control group were decreased significantly （P＜0.05）. There was no statistical significance in the above
quantitative indexes between the IRN-H group and the positive control group （P＞0.05）. Compared with the IRN-H group， the
above quantitative indexes of the IRN-H+CCL2 group were increased significantly （P＜0.05）. CCL2 reversed the protective effect
of high-dose IRN on asthmatic mice. CONCLUSIONS IRN may reduce the release of airway inflammatory factors in asthmatic
mice by inhibiting the activation of the MCP-1/CCR2 signaling pathway， so as to achieve the purpose of improving asthma.
KEYWORDS isorhynchophylline； asthma； monocyte chemotactic protein-1/CC chemokine receptor 2 signaling pathway； airway
inflammation

哮喘是一种常见的以气道高反应性和气道炎症为 （Ea）-02244]购自美国R&D Systems公司；肿瘤坏死因子
特征的疾病，以咳嗽、喘息、胸闷和呼吸困难为主要症 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素13（inter‐
状，无法治愈。除了避免接触过敏原，只能使用 β 肾上 leukin-13，IL-13）、IL-4 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂
腺素受体激动剂、吸入性皮质类固醇或白三烯 D4 受体 盒（货号分别为ml002095、ml063123、ml0631556）均购自
拮抗剂治疗哮喘，但长期使用上述药物容易引发白内 上海酶联生物科技有限公司；BCA 蛋白定量试剂盒（货
障、骨质疏松等不良反应，故寻找新的治疗方案至关重 号P0012）、RIPA缓冲液（货号P0013）均购自上海碧云天
[1]
要 。异钩藤碱（isorhynchophylline，IRN）是钩藤的主要 生物技术有限公司；小鼠 MCP-1、CCR2、甘油醛-3-磷酸
活性成分之一，具有抗高血压、保护神经、抗增殖和抗炎 脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的
[2]
等多种生物学效应 ，主要用于治疗心血管和中枢神经 山羊抗小鼠 IgG 二抗（货号分别为 ab308522、ab273050、
[3]
[4]
系统疾病 。Zhu 等 研究发现，IRN 能抑制炎症因子的 ab8245、ab205719）均购自英国Abcam公司。
产生以及气道平滑肌细胞的增殖并诱导其凋亡，具有治 1.3 实验动物
疗哮喘的潜在作用。单核细胞趋化蛋白 1（monocyte SPF级雌性BALB/c小鼠，7周龄，体重（18±2）g，由
chemotactic protein-1，MCP-1）也被称为 CC 趋化因子配 陆军军医大学医学实验动物中心提供，生产许可证号为
体 2（CC chemokine ligand 2，CCL2），是 CC 趋化因子家 SCXK（渝）2022-0011。小鼠饲养在单独通风的无菌笼
族的成员，可与 CC 趋化因子受体 2（CC chemokine re‐ 里，室温为 22 ℃，相对湿度控制在（50±5）%，12 h 昼夜
ceptor 2，CCR2）结合，在单核巨噬细胞和 T 细胞的迁移 交替，并随时获得标准食物和正常饮用水。本研究所有
中起关键作用，是治疗慢性炎症性疾病和急性肺损伤的 动物实验均经贵州中药大学动物实验伦理委员会批准
潜在靶点 [5―6] 。基于以上文献，本研究拟探讨 IRN 调节 （伦理编号20220006）。
MCP-1/CCR2 信号通路对哮喘小鼠气道炎症反应的影 2 方法
响，旨在为寻找治疗哮喘新药提供参考。 2.1 哮喘小鼠模型的建立、分组与给药
1 材料 参照文献方法 建立哮喘小鼠模型：随机选取50只
[7]
1.1 主要仪器 小鼠，分别在第1、7、14天腹膜内注射20 μg卵清蛋白和
402AI型超声雾化器购自江苏鱼跃医疗设备股份有 2 mg 氢氧化铝佐剂，在第 21 至 27 天通过超声雾化器吸
限公司；CX43 型光学显微镜购自日本 Olympus 公司； 入 3% 卵清蛋白溶液（每天 1 次，每次 30 min）。另取 10
elx808型多功能酶标仪购自美国BioTek公司；IC1000型 只小鼠，分别在第1、7、14天腹膜内注射等剂量的无菌磷
全自动细胞计数器购自北京众力挽生物科技有限公司； 酸盐缓冲液（PBS），在第21至27天通过超声雾化器吸入
RM2235型石蜡切片机购自德国Leica公司。 3% 无菌 PBS（每天 1 次，每次 30 min），标记为空白对照
1.2 主要药品与试剂 组。当造模小鼠出现烦躁不安、脾气躁动、张口喘息并
IRN 对照品（货号Ⅱ0310，纯度≥98%）、苏木精-伊 伴有饮水、喷嚏增多等现象，标志着哮喘小鼠模型建立
红（hematoxylin and eosin，HE）染色液（货号G1120）均购 成功。将50只造模成功的小鼠随机分为哮喘组、IRN低
自北京索莱宝科技有限公司；醋酸地塞米松片（货号 剂量（IRN-L）组、IRN 高剂量（IRN-H）组、IRN-H+CCL2
02621，规格0.75 mg）购自浙江仙琚制药股份有限公司； 组、阳性对照组，每组10只。其中，阳性对照组小鼠腹腔
[8]
卵清蛋白（货号 9006-59-1）购自美国 Sigma Aldrich 公 注射2 mg/kg地塞米松，同时灌胃生理盐水 ；IRN-L组、
[9]
司；MCP-1/CCR2 信号通路激活剂 CCL2 蛋白[货号 JN- IRN-H 组小鼠分别灌胃 10、20 mg/kg IRN ，同时腹腔注

中国药房 2023年第34卷第22期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 22 · 2741 ·