Page 64 - 《中国药房》2023年22期
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ALI是一种由各种肺内（吸入、注射、感染及创伤等）                       2.2 铁皮石斛多糖含量和提取率测定
          或肺外（休克、脓毒症等）致病因素导致肺泡结构受损而                           2.2.1 多糖含量
                                                                                        [7]
          引发肺部弥散性炎症和水肿反应的呼吸系统疾病。目                                 采用苯酚-硫酸法进行测定 。精确称取D（+）-无水
          前，临床尚无治疗 ALI 的特效药物，故其病死率维持在                         葡萄糖对照品 50 mg，加水定容至 50 mL 容量瓶中，得 1
                                      [2]
          较高水平，整体病死率高达 40% 。现代医学认为，ALI                        mg/mL 的无水葡萄糖标准溶液。分别准确量取上述标
          的病理学机制主要与肺组织局部过度的氧化应激和炎                             准溶液 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mL 于试管中，加
          症反应有关     [3―4] 。多糖作为铁皮石斛的主要活性成分，                   水定容至2 mL。吸取5%苯酚溶液1 mL，分别加到6只
          具有抗炎、抗氧化作用，且毒性极低               [5―6] 。基于此，本研        试管中，摇匀，迅速加入浓硫酸 5 mL，摇匀，静置 5 min，
          究以铁皮石斛为原料，采用超声辅助热水浸渍法提取铁                            于沸水中加热15 min，取出冷却至室温。采用紫外-可见
          皮石斛多糖，通过单因素实验和 Box-Behnken 响应面法                     分光光度计于 490 nm 波长处测定吸光度（A）值。以无
          优化提取工艺，并考察铁皮石斛多糖对小鼠 ALI 的影                          水葡萄糖质量浓度（c）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标，
          响，为铁皮石斛多糖的提取及药效研究提供理论依据。                            绘制无水葡萄糖标准曲线，得标准曲线方程为 A＝
          1 材料                                                14.707c+0.028 7（R ＝0.999 2）。方法学考察符合 2020
                                                                               2
          1.1 主要仪器                                            年版《中国药典》（四部）的相关要求。
              本研究所用主要仪器包括UV1802G型紫外-可见分                       2.2.2 多糖提取率
          光光度计（天津冠泽科技有限公司）、FW135 型粉碎机                             精确称取铁皮石斛多糖粉末 2.0 g，加水定容至 100
         （北京市永光明医疗仪器有限公司）、LEICARM2245 型                       mL 容量瓶中，摇匀，准确量取该多糖待检测溶液 1.0
          石蜡切片机（常州市雅博电子设备有限公司）、Axio-                          mL，加水定容至2 mL，加入5%苯酚溶液1 mL，摇匀，迅
          ImagerA2型蔡司正置荧光显微镜（北京博瑞斯科技有限                        速加入浓硫酸5 mL，摇匀，静置5 min，于沸水中加热15
          公司）等。                                               min，取出冷却至室温。采用紫外-可见分光光度计于
          1.2 主要药品与试剂                                         490 nm波长处测定A值，代入“2.2.1”项下标准曲线方程
              铁皮石斛药材购自南宁市药材市场，经广西中医药                          计算多糖质量浓度，并按下式计算铁皮石斛多糖提取
          大学药学院谭勇教授鉴定为兰科植物铁皮石斛D. offici‐                      率：多糖提取率＝提取液中多糖质量浓度×提取体积/铁
          nale Kimura et Migo 的干燥茎；醋酸泼尼松片（批号                  皮石斛多糖粉末质量×100%。
          20220313，规格 5 mg）购自上海金不换兰考制药有限公                     2.3 铁皮石斛多糖提取工艺优化
          司；浓硫酸（批号 20190301）购自新疆德瑞生物有限公                       2.3.1 单因素实验
          司；苯酚（分析纯）购自天津市风船化学世纪科技有限公                               前期预实验结果表明，料液比、提取时间、提取温度
          司；D（+）-无水葡萄糖对照品（批号 110833-201906，纯                  均能显著影响铁皮石斛多糖的提取率，因此本研究选择
          度 ≥98%）和 脂 多 糖 对 照 品（批 号 20220208，纯 度 ≥             料液比、提取时间、提取温度为因素进行单因素实验。
          98%）均购自北京索莱宝科技有限公司；苏木精-伊红                           分别称取铁皮石斛药材 0.2 g，共 5 份，按“2.1”项下方法
         （HE）染色试剂盒（批号 20190608）、Masson 染色试剂盒                  操作。其中，料液比单因素实验条件如下：以700 W功率
         （批号20180302）均购自南京建成生物工程研究所。                          超声 15 min，提取温度为 70 ℃，提取 2 次，提取时间为
          1.3 实验动物                                            2 h，设置料液比（g/mL，下同）分别为 1∶20、1∶25、1∶30、
              昆明小鼠 90 只，雄性，SPF 级，体重 20～22 g，购自                1∶35、1∶40；提取时间单因素实验条件如下：以 700 W
          河南斯克贝斯生物科技股份有限公司，生产许可证号为                            功率超声 15 min，提取温度为 70 ℃，提取 2 次，料液比
          SCXK（豫）2020-0005。本实验方案经新疆医科大学实                      为 1∶30，设置提取时间分别为1、2、3、4、5 h；提取温度单
          验 动 物 伦 理 委 员 会 审 批 ，伦 理 审 批 号 为 IACUC-             因素实验条件如下：以 700 W 功率超声 15 min，提取时
          20220728-10。                                        间为2 h，提取2次，料液比为1∶30，设置提取温度分别为
          2 方法与结果                                             50、60、70、80、90 ℃。考察各因素对铁皮石斛多糖提取
          2.1 铁皮石斛多糖的提取                                       率的影响，结果见图1。
              称取铁皮石斛药材 5 g，水洗后置于 60 ℃烘箱中烘                         由图 1A 可以看出，铁皮石斛多糖提取率随料液比
          干至恒重，粉碎，过 40 目筛；粗粉加入 10 倍量水，于                       的改变呈现波浪形变化，当料液比为1∶30时，铁皮石斛
          70 ℃下以 700 W 功率超声浸提，抽滤，滤液浓缩至原液                      多糖提取率达到最大值；由图1B可以看出，铁皮石斛多
          的 1/3，再加入 3 倍量的无水乙醇，于 4 ℃下静置 12 h 后                 糖提取率随提取时间的延长先升高后降低，当提取时间为
          滤过，收集沉淀，置于 50 ℃烘箱中烘干，得多糖粉末并                         2 h时，铁皮石斛提取率达到最大值；由图1C可以看出，铁
          按下式计算铁皮石斛多糖得率：多糖得率（%）＝多糖粉                           皮石斛多糖提取率随提取温度的升高先升高后降低，当提
          末质量/铁皮石斛质量×100%。                                    取温度为60 ℃时，铁皮石斛多糖提取率达到最大值。


          · 2746 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 22                            中国药房  2023年第34卷第22期
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