Page 56 - 《中国药房》2023年22期

20 a
Fe 2+ 水平 15 5 a a
10
0
对照组 40 80 120
VTM不同浓度组/
（μmol/L）
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
Ⅰ：对照组的Fe 荧光显微图；Ⅱ：VTM 40 μmol/L组的Fe 荧光显微图；Ⅲ：VTM 80 μmo/L组的Fe 荧光显微图；Ⅳ：VTM 120 μmol/L组的Fe 2+
2+
2+
2+
荧光显微图；Ⅴ：各组细胞的Fe 水平柱形图；a：与对照组比较，P＜0.01。
2+
2+
图7 VTM对U251细胞内Fe 水平的影响（x±s，n＝3）
发光成像系统下曝光成像。使用 Image J 软件进行分 结合交集靶点分析及铁死亡相关研究结果 [6―9] ，选取
析，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH）的灰度值比值作 Nrf2/HO-1/GPX4信号通路进行初步验证。
为各目的蛋白的表达水平。结果（图 8）显示，与对照组 本研究通过 CCK-8 法、细胞克隆形成实验、细胞形
比较，VTM 80、120 μmol/L 组细胞内 GPX4 蛋白的表达 态变化观察发现，不同浓度的 VTM 可不同程度地抑制
水平均显著降低（P＜0.01），VTM 120 μmol/L 组细胞内 U251细胞的增殖和克隆形成，并可造成细胞萎缩、细胞
Nrf2 蛋白和 VTM 各浓度组细胞内 HO-1 蛋白的表达水 核破碎等，上述作用有一定的浓度依赖趋势，初步确定
平均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），上述作用有一定的 了VTM对U251细胞活性的抑制作用。研究指出，铁死
[7]
浓度依赖趋势。 亡不仅是GBM细胞程序性死亡过程中的主要类型 ，而
且可影响脑胶质瘤患者的药物治疗效果及预后，还可影
1.5
Nrf2 68 kDa a 响神经退行性疾病的病理过程 [8―9] ，提示铁死亡可作为
Nrf2蛋白表达水平
HO-1 33 kDa 1.0 神经肿瘤、神经系统疾病治疗和新药研发的关键靶点。
GPX4 17 kDa 0.5 作为一种细胞死亡方式，铁死亡与其他死亡方式的区别
GAPDH 37 kDa 在于，铁死亡涉及了铁代谢和脂质ROS蓄积的过程，Fe 2+
0
对照组 40 80 120 对照组 40 80 120 可通过芬顿反应来诱导细胞内ROS的蓄积，从而诱导铁
VTM不同浓度组/ VTM不同浓度组/ [5]
（μmol/L） （μmol/L） 死亡的发生 。为了验证 VTM 能否通过铁死亡来抑制
A.相关蛋白表达电泳图 B. Nrf2蛋白表达柱形图 GBM 细胞活性，本研究采用 DCFH-DA 和 FerroOrange
1.5 a 1.5 荧光探针法分别检测了 VTM 作用后细胞内 ROS 和 Fe 2+
HO-1蛋白表达水平 1.0 b a GPX4蛋白表达水平 1.0 a a 可诱导细胞内ROS和Fe 的蓄积，且有浓度依赖趋势。
水平，结果显示，二者荧光强度均明显增强，提示 VTM
2+
0.5
0.5
近期多项研究表明，Nrf2/HO-1/GPX4 信号通路与
0 0 铁死亡通路调控密切相关。其中，Nrf2、HO-1 是抗氧化
对照组 40 80 120 对照组 40 80 120
VTM不同浓度组/ VTM不同浓度组/ 系统的主要调控因子，同时也在涉及铁死亡的铁代谢、
（μmol/L） （μmol/L） [10―13]
C. HO-1蛋白表达柱形图 D. GPX4蛋白表达柱形图 脂质代谢等过程中发挥了重要作用 。研究指出，作
a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05。 为调节氧化还原稳态的重要蛋白，Nrf2的异常表达可导
[14]
图8 VTM对U251细胞内铁死亡通路相关蛋白表达的 致脂质氧化及铁死亡的发生 ；同时，Nrf2 可在上游调
影响（x±s，n＝3） 节HO-1蛋白的表达，以启动对细胞的保护作用，可通过
[15]
调控 GPX4 蛋白的表达，进而影响细胞铁死亡进程 。
3 讨论
此外，作为细胞抗氧化活性的重要调节因子，Nrf2 还具
GBM是恶性程度高、侵袭性强、致死率高的中枢神
有一定的双重作用：在正常情况下，该蛋白的表达水平
经系统恶性肿瘤，严重影响患者的生存质量 。考虑到 较低，被激活后可抑制肿瘤的形成；在病理条件下，Nrf2
[1]
现有疗法的局限性，挖掘靶向抑制 GBM 细胞增殖的药 能促进肿瘤细胞的增殖及转移，减轻化疗药物导致的氧
物对改善患者预后具有重要的临床意义。 化应激损伤，阻止肿瘤细胞凋亡、自噬并促进耐药，从而
本研究在前期预实验基础上，首先借助网络药理学 影响患者预后 [16―17] 。有研究发现，Nrf2在高级别胶质瘤
手段，筛选得到了VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶 细胞中有更高的表达，可作为胶质瘤病理分析的标志
点 462 个；随后的 GO 功能富集结果显示，VTM 干预 物 。GPX4是一种启动内源性抗氧化反应元件的转录
[18]
2+
GBM 的 CC 包括胞质囊泡、线粒体膜等，MF 涉及 Fe 结 因子，也是铁死亡的重要调节因子，可保护细胞免受
合、DNA转录过程等，BP以氧化应激、细胞凋亡等为主； ROS蓄积所致的氧化损伤，维持细胞脂质稳态；当GPX4
进一步的KEGG富集结果显示，VTM干预GBM的作用 表达被抑制时，脂质过氧化物将不断蓄积，并进一步诱
靶点分布于铁死亡、PI3K/Akt等信号通路。上述结果提 导铁死亡的发生 [10―13] 。与正常神经胶质细胞相比，人
示，VTM 对 GBM 的干预作用可能是通过激活氧化应 GBM 细胞（U251 和 U87）中 GPX4 蛋白的表达水平更
[19]
激、铁死亡等信号通路来实现的。基于此推测，本研究 高，且该蛋白对铁死亡诱导剂的敏感性更强 。可见，

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