Page 54 - 《中国药房》2023年22期

response to oxidative stress hepatitis B
cellular response to chemical stress human cytomegalovirus infection
response to nutrient levels
cellular response to oxidative stress ferroptosis
富集基因数 lipid and atherosclerosis P
response to oxygen levels 9.32×10 －24
40
neuron death 50 HIF-1 signaling pathway 1.14×10 －15
60 Kaposi sarcoma-associated herpesvirus 2.29×10 －15
response to decreased oxygen levels 70 infection 3.43×10 －15
regulation of neuron death central carbon metabolism in cancer －15
P 4.57×10
regulation of apoptotic signaling pathway 4.06×10 －22 coronavirus disease：COVID-19
3.05×10 －22
response to hypoxia 2.03×10 －22 PI3K/Akt signaling pathway
response to metal ion 1.02×10 －22
6.43×10 －46 prostate cancer
cellular response to external stimulus
response to reactive oxygen species 0 20 40 60
cellular response to oxygen levels 富集基因数
cellular response to decreased oxygen levels 图2 VTM干预GBM的KEGG富集结果柱状图（富集
0.100 0.125 0.150 基因占比排名前10位）
富集基因占比
A. BP
[4]
参考相关文献 设置），并设置不加药物、不加细胞的空
focal adhesion
cell-substrate junction 白组，每组设 3 个复孔。培养 24 h 后，每孔加入 CCK-8
vesicle lumen 工作液10 μL，孵育1 h。使用酶标仪于450 nm波长处检
secretory granule lumen
富集基因数
cytoplasmic vesicle lumen 20 测各孔的光密度（OD）值并按下式计算细胞存活率：细
membrane raft 30
40 胞存活率＝（OD 实验组－OD 空白组）/（OD 对照组－OD 空白组）×
membrane microdomain 50
organelle outer membrane 100%。采用 GraphPad Prism 8.3.0 软件对数据进行统计
P
outer membrane 8.0×10 －8
6.0×10 －8 分析，实验数据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方
cytosolic ribosome
4.0×10 －8
melanosome 2.0×10 －8 差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验，检验水准α＝
pigment granule
ficolin-1-rich granule lumen 0.05（统计方法下同）。结果（图3）显示，与对照组比较，
small ribosomal subunit VTM 各浓度组的细胞存活率均显著降低（P＜0.01），且
cytosolic small ribosomal subunit
有一定的浓度依赖趋势。
0.04 0.06 0.08 0.10
富集基因占比 120
B. CC
100
DNA-binding transcription factor binding
RNA polymerase Ⅱ-specific DNA-binding
transcription factor binding 80
ubiquitin-like protein ligase binding a
ubiquitin protein ligase binding 细胞存活率/% 60
DNA-binding transcription activator activity， 富集基因数 a
RNA polymerase Ⅱ-specific 10 40 a a
DNA-binding transcription activator activity 20 a
30
cadherin binding 40 20 a
50
protein serine/threonine kinase activity
cytokine activity P 0
cytokine receptor binding 1.0×10 －6 对照组 40 60 80 100 120 140
transcription coregulator binding 5.0×10 －7 VTM不同浓度组/（μmol/L）
iron ion binding a：与对照组比较，P＜0.01。
p53 binding 图3 不同浓度VTM对U251细胞存活率的影响（x±s，
antioxidant activity
type Ⅰ interferon receptor binding n＝3）
0.025 0.050 0.075 0.100 0.125
富集基因占比 2.2.3 细胞克隆形成能力检测
C. MF 采用细胞克隆形成实验进行检测。取对数生长期
图1 VTM 干预 GBM 的 GO 功能富集结果气泡图（富
的 U251 细胞，按 500 个/孔接种于 6 孔板中，常规培养过
集基因占比排名前15位）
夜。将细胞分为对照组和VTM不同浓度组（40、80、120
2.2 体外细胞实验 μmol/L，浓度参考“2.2.2”项下实验结果设置），每组设 3
2.2.1 细胞培养 个复孔。培养24 h后，弃去培养基，加入新鲜培养基，培
将 U251 细胞培养于含 10% 胎牛血清的 DMEM 高 养 14 d；弃去培养基，细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤
糖培养基中，于 37 ℃、5%CO2条件下培养，隔天换液传 后，置于4%多聚甲醛固定液中固定20 min，随后用0.1%
代，取对数生长期细胞进行后续实验。 结晶紫染色液染色 30 min，用 PBS 洗涤后自然干燥，拍
2.2.2 细胞存活率检测 照并观察细胞克隆形成情况，按下式计算细胞克隆形成
采用CCK-8法进行检测。取对数生长期的U251细 率：细胞克隆形成率＝集落形成数/每孔细胞总数×
胞，按 5 000 个/孔接种于 96 孔板中，按“2.2.1”项下方法 100%（细胞数＞50 为 1 个集落）。结果（图 4）显示，80、
常规培养过夜。将细胞分为对照组（VTM 0 μmol/L）和 120 μmol/L 的 VTM 均可显著抑制 U251 细胞的克隆形
VTM不同浓度组（40、60、80、100、120、140 μmol/L，浓度 成（P＜0.05或P＜0.01）。

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