Page 63 - 《中国药房》2023年8期

的起始含量（μg/g），t为反应时间（h），k0为零级反应速率 示，以水-甲醇为流动相时，5-HMF 峰存在明显的前沿，
常数，k1为一级反应速率常数。 洗脱效果显著低于另外 2 种流动相。进一步比较后，
Arrhenius公式：k＝kf exp（－Ea/RT）⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ （3） 0.1% 磷酸溶液-甲醇、0.1% 甲酸溶液-甲醇所得 5-HMF
式中，kf 为速率因子（1/d），R 为气体常数[8.314 峰形基本一致，但考虑到甲酸具有腐蚀性和刺激性，故
J/（k·mol）]，T为热力学温度（K）。 选择 0.1% 磷酸溶液-甲醇为流动相。同时，本课题组又
拟合后建立的模型以根平均方差（root mean square 对 0.1% 磷酸溶液与甲醇的体积比（95∶5、90∶10、85∶15）
2
error，RMSE）、回归系数（R）、精确因子（accuracy factor， 进行优化，结果显示，当二者体积比为 90∶10 时，所得
Af ）和偏差因子（bias factor，Bf ）对模型进行评价，公式 5-HMF峰形最佳，故选择 0.1% 磷酸溶液-甲醇（90∶10，
[13]
如下 ： V/V）为 5-HMF含量测定的流动相。
RMSE＝ å(预测值 - 实测值) /(n - 1)⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ （4） 3.2 不同制粒工艺对盐酸氨基葡萄糖片中5-HMF含量
2
Af＝10 ∑|lg（预测值/实测值）|/n ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ （5） 的影响
∑lg（预测值/实测值）/n 本课题组前期调研并收集了不同厂家的盐酸氨基
Bf＝10 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ （6）
葡萄糖片，结果发现，不同厂家的生产工艺特性、工艺参
式中，n为实测值个数。
采用Excel 2016对表1中的5-HMF含量结果进行拟 数差异较大，5-HMF含量也相距甚远。5-HMF作为氨基
合。结果显示，50、60、70、80 ℃下，5-HMF 含量与反应 葡萄糖美拉德反应的降解产物，不同制粒工艺对5-HMF
时间均呈线性关系，符合零级动力学模型，k值随反应温 具有较大的影响。本研究所用盐酸氨基葡萄糖片采用
度升高而增大。模型评价结果显示，不同反应温度线性 湿法制粒，需对药物颗粒进行干燥处理，因此干燥温度、
拟合的 R 均大于 0.96，Af和 Bf值均接近 1，RMSE 的值较 干燥时间可直接影响样品中 5-HMF 含量，温度越高、时
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小，表明不同反应温度模型对数据的拟合度高、精确性 间越长，样品中5-HMF含量越高。而采用干法制粒的盐
[14]
好 ，提示该模型能够很好地描述5-HMF含量随反应时 酸氨基葡萄糖片不涉及干燥处理，通过对4批不同生产
间变化的规律。5-HMF 的Ea为16.00 kJ/mol，Ea较低，表 日期的样品进行测定，发现 5-HMF 的平均含量仅为 2.4
明反应速率对反应温度具有较强的依赖性，较高反应温 μg/g。本课题组前期参考湿法制粒工艺中的干燥温度
度下更容易发生反应，提示反应温度和反应时间是影响 和时间，利用反应动力学模型预测得到50、60、70、80 ℃
盐酸氨基葡萄糖片中 5-HMF 形成的重要因素。结果见 下 加 热 2 h 产 生 的 5-HMF 含 量 分 别 为 12.09、15.93、
图2、表3。 36.51、43.75 μg/g；加热 4 h 的 5-HMF 含量分别为 12.66、
140 16.57、37.25、44.70 μg/g。预测结果显示，在短时间的加
80 ℃
120 70 ℃ 热过程中，反应温度相比反应时间，对 5-HMF 含量影响
（ μg/g ） 100 50 ℃ 更大。考虑到 5-HMF 为基因毒性杂质且在贮存中仍会
60 ℃
80
5-HMF含量/ 60 持续形成，因此厂家应将样品中5-HMF含量尽可能降到
40
20 最低。在湿法制粒工艺中，建议厂家优先选择较低干燥
0 温度（如50 ℃），适当延长干燥时间，在不影响疗效的前
1 2 3 4 5 6 7
t/d 提下，进一步降低样品中5-HMF的含量。为验证不同批
图2 不同反应温度下5-HMF的含量-时间曲线 号样品中5-HMF含量与原料药是否存在相关性，本课题
表3 5-HMF形成动力学分析结果 组咨询厂家后发现，原料药均来自同一厂家，且均未检
温度/℃ 拟合方程 k R 2 A f B f RMSE 出 5-HMF，表明盐酸氨基葡萄糖片中测得的 5-HMF 很
50 C t＝11.53+6.789t 6.789 0.962 9 1.081 1.001 2.922
60 C t＝15.28+7.715t 7.715 0.965 7 1.070 1.012 3.142 可能为其生产和贮存中降解产生。此外，影响氨基葡萄
70 C t＝35.78+8.815t 8.815 0.987 0 1.025 1.002 2.190 糖发生美拉德反应的因素较为复杂，氨基葡萄糖和辅料
80 C t＝42.80+11.430t 11.430 0.985 3 1.030 1.003 3.013
2 548 间化学特性的相容性也可能是影响 5-HMF 形成的因
k f
E a/（kJ/mol） 16.00 素之一，故后续有待对辅料的优选进行研究。
3 讨论 3.3 贮存条件对5-HMF含量的影响
3.1 流动相选择 本课题组前期运用公式（3），由 5-HMF 的 Ea预测得
本课题组前期分别对水-甲醇、0.1% 磷酸溶液-甲 到了10、20、30 ℃下的k值分别为2.836、3.577、4.443，提
醇、0.1% 甲酸溶液-甲醇流动相体系进行考察，结果显 示常温下盐酸氨基葡萄糖片中 5-HMF 形成反应速率对

中国药房 2023年第34卷第8期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 8 · 953 ·