Page 66 - 《中国药房》2023年8期

by the inflammatory factor IL-6， which ultimately interrupts the invasion and metastasis of breast cancer cells.
KEYWORDS ursolic acid； IL-6； breast cancer； JAK2/STAT3 pathway； invasion； migration

乳腺癌是发生在乳腺导管或上皮的恶性肿瘤，严重 LAS500型化学发光成像系统（日本Cytiva公司）等。
影响着女性的身心健康，研究报道其发病率已经超过肺 1.2 主要药品与试剂
癌，成为危害女性生命安全的第一大恶性肿瘤 。即使 胎牛血清（批号 WFQ0004）与 L-15 培养基（批号
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治疗方案不断更新，仍有部分患者在进行手术或放化疗 AG29798283）均购自美国 Hyclone 公司；CCK-8 试剂盒
后发生远处转移，这是治疗失败的主要原因之一。白细 （批号CK04）购自日本同仁化学研究所；IL-6冻干粉（批
胞介素 6（interleukin 6，IL-6）是肿瘤微环境中间质细胞 号 HY-P7044）购自美国 MedChemExpress 公司；熊果酸
与肿瘤细胞、间质细胞之间“相互交流”的重要媒介 。 （原料药，批号S2307）购自美国Selleck公司；人GAPDH
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其可激活下游Janus激酶2（Janus kinase 2，JAK2）与信号 内参引物（批号B661104）及其他基因引物由上海生工生
转导及转录激活因子 3（signal transduction and activator 物有限公司合成；鼠源GAPDH单克隆抗体，兔源JAK2、
of transcription 3，STAT3），进而调控肿瘤细胞的生物学 磷 酸 化 JAK2（p-JAK2）、MMP9、波 形 蛋 白（vimentin，
行为，如诱导肿瘤细胞增殖、上皮间质转化（epithelial- Vim）、CD44分子（CD44 molecule，CD44）、醛脱氢酶1家
mesenchymal transition，EMT）及化疗药物耐药等恶性行 族成员A1（aldehyde dehydrogenase 1 family member A1，
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为 。EMT的发生是一个动态过程，在此期间上皮来源 ALDH1A1）单克隆抗体，辣根过氧化物酶（horseradish
的肿瘤细胞失去黏附特性，骨架蛋白重构，向间质细胞 peroxidase，HRP）标记的山羊抗鼠二抗均购自武汉爱博
转变。EMT是肿瘤复发与远处转移的基础与重要环节。 泰克生物科技有限公司（批号分别为 2118S、A19629、
因此，寻找能够逆转肿瘤 EMT 过程的药物对肿瘤转移 AP0531、A0289、A19607、A19020、A0157、AS003）；鼠源
的防治至关重要。 STAT3单克隆抗体和兔源磷酸化STAT3（p-STAT3）、E钙
中药天然成分熊果酸是一种五环三萜类化合物，具 黏蛋白（E-cadherin，E-cad）单克隆抗体均购自美国 Cell
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有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种功效 。既往研究表明， Signaling Technology 公司（批号分别为 9139S、9145T、
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熊果酸能够抑制非小细胞肺癌 、胃癌 、肝癌 等肿瘤的 3195T）；兔源MMP2单克隆抗体（批号EPR1184）购自英
增殖、侵袭与迁移、血管生成等恶性行为，并可减弱乳腺 国 Abcam 公 司 ；HRP 标 记 的 山 羊 抗 兔 二 抗（批 号
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癌MCF-7细胞的侵袭能力 。Zhang等 研究显示，熊果 LZ2A002）购自上海莱兹生物科技有限公司；ECL 化学
酸可以核转录因子红系2相关因子2为靶点抑制乳腺癌 发光显影液（批号P90719）购自美国Millipore公司。
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细胞的增殖；Jiang 等 研究表明，熊果酸可通过丝裂原 1.3 实验细胞
活化蛋白激酶途径促进乳腺癌细胞凋亡。除此之外，熊 乳腺癌231细胞株购自中国科学院上海细胞库。
果酸也可对抗肿瘤的侵袭与迁移，可作用于 p53 肿瘤蛋 2 方法
白等分子进而下调基质金属蛋白酶2（matrix metallopro‐ 2.1 熊果酸对231细胞增殖率影响的检测
tein 2，MMP2）与 MMP9 等间质标志物的表达 。但其 采用CCK-8法检测熊果酸对231细胞增殖的影响。
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是否能通过 JAK2/STAT3 通路抑制乳腺癌 MDA-MB- 231 细胞生长在含 10% 胎牛血清、1% 双抗的 L-15 完全
231细胞（简称“231细胞”）的侵袭、迁移，具体机制还有 培养基中，37 ℃无CO2培养2～3 d，待其至生长对数期，
待探讨。本研究中采用 IL-6 刺激人乳腺癌231细胞，增 消化后配制细胞悬液（1×10 个/mL）。取100 µL种于96
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强其侵袭、迁移的能力，观察中药单体熊果酸能否减弱 孔板中，将细胞分为空白组（只有培养基，不铺细胞）、正
IL-6促侵袭、迁移效应，为后续研究熊果酸抑制乳腺癌侵 常组（正常培养细胞）与实验组（20、40、80、160、320
袭与迁移的作用机制提供理论支持。 µmol/L 熊果酸），每组设置 6 个复孔。熊果酸作用 48 h
1 材料 后每孔加入10 µL CCK-8溶液，37 ℃下孵育2 h，于酶标
1.1 主要仪器 仪450 nm波长处测量光密度（OD）值。熊果酸浓度梯度
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本研究所用主要仪器有 MCO-18AIC 型 CO2培养箱 与作用时间是依据前期课题组研究基础确定的 。计
（日本 Sanyo 公司），HR40-ⅡA2 型生物安全柜（青岛海 算细胞增殖率，细胞增殖率（％）＝（实验组OD值－空白
尔特种电器有限公司），Varioskan型多功能酶标仪、ⅦA 组OD值）/（正常组OD值－空白组OD值）×100%。
7DX 型实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quanti‐ 2.2 熊果酸对IL-6刺激后231细胞迁移影响的检测
tative polymerase chain reaction，q-PCR）仪（美国 Thermo 采用划痕实验检测熊果酸对231细胞迁移能力的影
Fisher Scientific 公司），Colibri 型超微量级分光光度计 响。消化对数生长期的 231 细胞，将细胞悬液调整至
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（德国Berthold公司），DMI1型显微镜（德国Leica公司）， 5×10 个/mL，取 1 mL 种于 6 孔板中，实验分为对照组、

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