Page 61 - 《中国药房》2023年8期
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横纹肌麻痹、内脏损害，同时具有神经毒性和一定的基                           211102、211121、220137、220326，规格 0.75 g/片）、盐酸
          因毒性，此外还可刺激眼睛、皮肤、上呼吸道及黏膜                    [1―3] 。  氨基葡萄糖片阴性样品（批号220622，规格0.75 g/片）均
          5-HMF 为含糖类药物生产和贮存中产生的主要降解产                         购自国内某厂家；甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯，水为超
          物，已在相关药品标准中规定了限值，如2020年版《中国                        纯水。
          药典》（一部、二部）中规定了 20 多个药品的 5-HMF 限                    2 方法与结果

          值。目前，关于 5-HMF 形成机制和安全性的报道较                         2.1 5-HMF的含量测定
                         [6]
          多 [4―5] 。祝清芬等 通过毒理学预测软件预测了 5-HMF                   2.1.1 色谱条件 以Shim-pack GIST C18-AQ（4.6 mm×
          的基因毒性，结果显示，5-HMF为2类基因毒性杂质，对                        150 mm，3 μm）为色谱柱，以0.1%磷酸溶液-甲醇（90∶10，
          人体具有遗传毒性，可能存在潜在的致癌性。                               V/V）为流动相；流速为1.0 mL/min；柱温为30 ℃；检测波
              氨基葡萄糖是从天然甲壳素中水解提取的氨基己                          长为284 nm；进样量为20 μL。
          糖，具有促进人体黏多糖合成，改善关节软骨代谢，促进                          2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取 5-HMF 对照品适
          软骨细胞修复，以及预防和治疗骨关节炎和骨质疏松症                           量，加水溶解，制成 5-HMF 质量浓度为 0.142 mg/mL 的
          的作用   [7―8] 。由于氨基葡萄糖结构中含有氨基和羰基，                    对照品储备液，于 4 ℃保存。精密吸取上述储备液适
          而美拉德反应又称为羰氨反应，因此氨基葡萄糖自身具                           量，加水稀释，制成 5-HMF 质量浓度为 5.698 μg/mL 的
                                   [9]
          备了发生美拉德反应的条件 ，这可触发 5-HMF 的形                        对照品溶液。
          成，因此有必要对氨基葡萄糖相关制剂中的5-HMF含量                         2.1.3 供试品溶液的制备 取盐酸氨基葡萄糖片10片，
                                                             除去包衣，研细，精密称取（约相当于盐酸氨基葡萄糖
          进行研究。氨基葡萄糖制剂主要以盐酸盐和硫酸盐形
                                                             500 mg）适量，置于 50 mL 容量瓶中，加水 40 mL，超声
          式存在，由于盐酸氨基葡萄糖制剂的稳定性、纯度以及
                                                            （功率 250 W，频率 40 kHz）处理 10 min，加水定容至刻
                                    [10]
          疗效高于硫酸氨基葡萄糖制剂 ，因此盐酸氨基葡萄糖
                                                             度，摇匀，静置5 min后，取上清液，经0.22 μm滤膜滤过，
          制剂的临床使用更为广泛。目前，有研究测定了盐酸氨
                                                             即得。
                                       [11]
          基葡萄糖原料药中 5-HMF 的含量 ，但其制剂（片、胶
                                                             2.1.4 阴性样品溶液的制备 称取盐酸氨基葡萄糖片
          囊）中5-HMF的含量测定尚未见报道。盐酸氨基葡萄糖
                                                             阴性样品，按“2.1.3”项下方法制备阴性样品溶液。
          胶囊为原料过筛后直接填装，工艺简单，而片剂生产工
                                                             2.1.5 专属性试验 分别精密吸取上述对照品溶液、供
          艺较为复杂，不同厂家的工艺特征和工艺参数不同，这
                                                             试品溶液和阴性样品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样
                                     [12]
          对 5-HMF 的形成具有较大影响 。本课题组前期研究
                                                             测定，记录色谱图。结果显示，供试品溶液中 5-HMF 和
          发现，采用湿法制粒工艺生产的盐酸氨基葡萄糖片中
                                                             相邻峰之间分离良好，在阴性样品溶液中与5-HMF相同
          5-HMF含量较高，且与贮存时间存在一定的相关性。因
                                                             保留时间处无干扰峰。结果见图1。
          此，本研究采用高效液相色谱（HPLC）法测定了盐酸氨
                                                             2.1.6 线性关系及定量限、检测限考察 精密吸取
          基葡萄糖片中5-HMF的含量，通过对不同温度反应体系
                                                            “2.1.2”项下对照品储备液适量，加水稀释，制成 5-HMF
          中 5-HMF 含量进行拟合，并建立反应动力学模型，以分
                                                             质量浓度分别为 5.698、2.849、1.425、0.712、0.285、0.057
          析其含量变化规律及影响因素，旨在为临床安全用药提
                                                             μg/mL 的系列标准溶液。取上述系列标准溶液，按
          供参考。
                                                            “2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以5-HMF
          1 材料                                               质量浓度（x）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回
          1.1 主要仪器                                           归。结果显示，5-HMF的回归方程为y＝151.69x－1.389
              本研究所用主要仪器有1260型HPLC仪（美国Agi‐                   （r＝0.999 9），表明 5-HMF 检测质量浓度的线性范围为
          lent 公司）、XSE205DU 型电子天平[梅特勒-托利多仪器                  0.057～5.698 μg/mL。取线性范围内最低质量浓度溶液
         （上海）有限公司]、DHG-9071A型电热恒温干燥箱（上海                     （0.057 μg/mL），加水稀释，分别以信噪比10∶1作为定量

          精宏实验设备有限公司）、KQ-250DV 型数控超声波清                       限，3∶1作为检测限。结果显示，定量限为17.09 ng/mL，
          洗器（昆山市超声仪器有限公司）等。                                  检测限为5.70 ng/mL。
          1.2 主要药品与试剂                                        2.1.7 精密度试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号
              5-HMF对照品（批号111626-202215，纯度99.5%）购             S1），按“2.1.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰面
          自中国食品药品检定研究院，8批盐酸氨基葡萄糖片（编                          积。结果显示，5-HMF 峰面积的 RSD 为 0.21%（n＝6），
          号S1～S8，批号分别为201257、210213、210503、210914、           表明方法精密度良好。


          中国药房  2023年第34卷第8期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 8    · 951 ·
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