Page 47 - 《中国药房》2023年4期

别 分 析（orthogonal partial least squares-discriminant 子峰。将所有实验样本和质控样本提取得到的峰，经
analysis，OPLS-DA），从而在同一判别标准下观察不同 Pareto-scaling 后进行无监督的 PCA，观察聚类分组情
组 别 是 否 呈 现 各 自 聚 类 现 象 。 通 过 MetaboAnalyst 况，结果发现生甘遂组、醋甘遂组分别与空白组区分明
（https：//www.metaboanalyst.ca/）对所得差异代谢物进行 显，结果见图3、图4。
显著富集通路分析，对甘遂炮制减毒机制潜在靶点进行 ■ 空白组 ■ 空白组
80 ■ 生甘遂组 80 ■ 生甘遂组
预测。 60 60
40 40
3 结果 20 20 0
t[2] 0 t[2]
3.1 系统稳定性评价结果 －20 －20
－40 －40
将 3 组供试品溶液检测后的质控样本总离子流图 －60 －60
－80 －80
（图1）进行比较，结果表明，各色谱峰的响应强度和保留 －100 －100
－150 －100 －50 0 50 100 －150 －100 －50 0 50 100
时间基本重叠，说明在整个实验过程中仪器误差引起的 t[1] t[1]
A.正离子 B.负离子
变异较小，检测环境相对较稳定。 图3 生甘遂组与空白组对比的正、负离子模式PCA得
100 分图
80
相对丰度/% 60 80 ■ 醋甘遂组 80 ■ 醋甘遂组
■ 空白组
■ 空白组
40
60
60
20
0 40 40
20
20
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 t[2] 0 t[2] 0
t/min －20 －20
A.空白组检测后的质控样本 －40 －40
－60 －60
100 －100 －100
－80
－80
相对丰度/% 60 －150 －100 －50 0 50 100 －150 －100 －50 0 50 100
80
t[1]
t[1]
40
A.正离子
B.负离子
20
0 图4 醋甘遂组与空白组对比的正、负离子模式PCA得
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
t/min 分图
B.生甘遂组检测后的质控样本
3.4 总体样本的OPLS-DA
100
80
相对丰度/% 60 的关系模型，来实现对样品类别的预测。同时通过计算
运用OPLS-DA建立代谢物表达量与样品类别之间
40
20
0 变量投影重要性（variable importance in projection，VIP）
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
t/min 值来衡量各代谢物的表达模式对各组样本分类判别的
C.醋甘遂组检测后的质控样本 影响强度和解释能力，从而辅助标志代谢物的筛选（以
图1 3组供试品溶液检测后质控样本的总离子流图
VIP 值＞1 作为筛选标准）。如图 5、图 6 所示，可见
3.2 甘遂醋炙前后对生理状态大鼠尿液代谢轮廓表征 OPLS-DA能区分生甘遂组、醋甘遂组与空白组样本，正、
的影响 负离子模式数据建立的OPLS-DA未发生过度拟合。
如图2所示，生甘遂组、醋甘遂组和空白组大鼠尿液 ■ 空白组 ■ 空白组
100 ■ 生甘遂组 100 ■ 生甘遂组
代谢轮廓有一定差异。 80 80
60
60
40
40
20
相对丰度/% 100 0 1.260 19＊to[1] －20 0 1.273 26＊to[1] －20 0
20
50
－40
－40
3
4
2
1
5
0
6
t/min 7 8 9 10 11 12 －60 －60
－80
－80
A.空白组 －100 －100
－150 －100 －50 0 50 100 －150 －100 －50 0 50 100
100
相对丰度/% 50 0 A.正离子 B.负离子
1.000 49＊t[1]
1.000 45＊t[1]
0
1
2
5
3
6
4
t/min 7 8 9 10 11 12 图5 生甘遂与空白组对比的正、负离子模式OPLS-DA
B.生甘遂组 得分图
相对丰度/% 50 0 3.5 生甘遂与空白组尿液中显著性差异代谢物的筛选
100
0
1
4
5
3
2
6
t/min 7 8 9 10 11 12 以 P＜0.05，VIP 值＞1 为筛选标准，筛选出组间差
C.醋甘遂组 异物1 042个，其中与空白组相比，生甘遂组表达量上调
图2 3组大鼠尿液的总离子流图 的差异物 553 个，下调的差异物 489 个。经 HMDB 数据
3.3 总体样本的PCA 库比对进一步筛选出与人类代谢密切相关的内源性代
各组大鼠尿液代谢物离子峰进行数据降维和质谱 谢物20个，以此作为显著性差异代谢物，其中上调的代
矩阵信息提取后得到 6 364 个正离子峰和 6 278 个负离 谢物12个，下调的代谢物8个。结果见表1。
中国药房 2023年第34卷第4期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 4 · 425 ·