Page 52 - 《中国药房》2023年4期
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采用弥漫性脑血栓大鼠模型 ，以脑组织中伊文思蓝                             乙酯溶液连续萃取6次，合并滤液，利用旋转蒸发仪回收
                                    [13]
         （Evans blue，EB）含量为评价指标，比较天麻不同提取部                     乙酸乙酯、浓缩，得乙酸乙酯提取物（得率为2.13%）和乙
          位的抗IS作用，以筛选出天麻抗IS的有效部位，为IS的                         酸乙酯提取残渣（得率为9.45%）。

          中药新药开发提供参考。                                         2.2 给药溶液的制备
          1 材料                                                    依据预实验，精密称取天麻醇提取物、天麻醇提取
          1.1 主要仪器                                            残渣、天麻乙酸乙酯提取物、天麻乙酸乙酯提取残渣各
              本研究所用主要仪器包括ZDHW型调温电热套（北                         适量，分别加入聚山梨酯-80适量，使完全溶解后用蒸馏
          京中兴伟业仪器有限公司）、NVC-2100 型旋转蒸发仪                        水定容，制成所需质量浓度后，于4 ℃密封保存，备用。
         （日本EYELA株式会社）、1260 Infinity Ⅱ型高效液相色                  2.3 大鼠弥漫性脑血栓模型的建立
                                                                                                        [13]
          谱仪（美国Angilent Technologies公司）、KA-1000型台式                参照文献方法，建立大鼠弥漫性脑血栓模型 。用
                                                              异氟烷吸入麻醉大鼠，并肌内注射治疗剂量的阿托品，
          低速离心机（上海安亭科学仪器厂）、QL-861型旋涡混合
          器（江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司）、Infinite                       使右侧颈部皮下筋膜暴露，钝性分离右侧颈总动脉、颈
                                                              外动脉，并结扎颈外动脉分支和颈总动脉近心端，在其
          M200 PRO型酶标仪（瑞士Tecan公司）、AB204-S型电子
                                                              远心端用动脉夹夹紧，显微剪在颈总动脉游离端剪一个
          分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。
                                                              小口，插入导管，去除动脉夹。将 0.5 mg/kg AA 经导管
          1.2 主要药品与试剂
                                                              注入颈总动脉，后结扎远心端动脉，进行缝合。实验过
              天麻药材购自云南省昭通市彝良县原生态天麻种
                                                              程 中 使 大 鼠 仰 卧 于 加 热 垫 上 ，保 持 肛 温 恒 定 在
          植专业合作社，经昭通天麻研究所陈顺芳鉴定为真品。
                                                              37 ℃ [12，14] 。假手术组钝性分离大鼠右侧颈总动脉、颈外
          阿司匹林（批号 MKBT1587V，纯度 99%）和 EB 染料（批
                                                              动脉后即可进行缝合，不注入AA。
          号 MKBTQ3656V）均购自美国 Sigma 公司；阿托品注射
                                                              2.4 分组与给药
          液（批号130404，规格10 mg/支）购自上海禾丰制药有限
                                                                  根据前期天麻药效学实验结果，在保证天麻药材量
          公司；天麻素（批号J1516031，纯度98%）购自美国Allad‐
                                                              一致的情况下按提取率折算大鼠天麻生粉和各提取部
          din公司；无水乙醇（批号20160310，分析纯）和乙酸乙酯
                                                              位等的给药剂量：天麻生粉为1.740 g/kg，天麻醇提取物
         （批号20161020，分析纯）均购自天津市风船化学试剂科
                                                              为 0.843 g/kg，天麻醇提取残渣为 1.610 g/kg，天麻乙酸
          技有限公司；花生四烯酸（arachidonic acid，AA；批号
                                                              乙酯提取物为 0.155 g/kg，天麻乙酸乙酯提取残渣为
          XKN3C-JG，规格 50 mg/支）购自东京化成工业株式
                                                                                         [15]
                                                              0.689 g/kg，天麻素为 0.026 g/kg 。将 72 只大鼠随机分
          会社。
                                                              为假手术组、模型组、阿司匹林组（阳性对照药，0.100
          1.3 实验动物
                                                                 [11]
                                                              g/kg ）、天麻生粉组、天麻醇提取物组、天麻醇提取残渣
              SPF级雄性SD大鼠72只，体质量250～300 g，6～8
                                                              组、天麻乙酸乙酯提取物组、天麻乙酸乙酯提取残渣组、
          周龄，由斯贝福（北京）生物技术有限公司提供，生产许
                                                              天麻素组，每组8只。各组大鼠均按每100 g体质量灌胃
          可证号为 SCXK（湘）2019-0004。所有大鼠饲养在温度
                                                              相应药液 1 mL，每日 1 次，连续 7 d，末次给药 1 h 后按
          为 20～25 ℃，相对湿度为 50%～65%，12 h 昼夜交替的
                                                             “2.3”项下方法建立大鼠弥漫性脑血栓模型。
          环境中，自由进食与饮水。动物实验方案经本单位实验
                                                              2.5 缺血侧脑组织EB渗出及EB含量测定
          动物伦理委员会审批通过（编号为R-062019LH001）。
                                                              2.5.1 EB渗出情况观察 大鼠AA注入5 min后立即注
          2 方法                                                入 0.2%EB（每 100 g 体质量注入 0.5 mL），5 min 后立即
          2.1 天麻不同提取部位的制备                                     断头处死，取大脑，称取脑湿重后，沿脑桥上界面切断，
          2.1.1 天麻醇提取物和醇提取残渣 取天麻药材粉碎                          去除嗅球。由前向后做连续冠状切片，共 5 片。第 1 刀
          物过2号筛，取100 g用3倍生药量的70%乙醇溶液回流                        在脑前极与视交叉连线中点，第2刀在视交叉处，第3刀
          提取3次，提取时间分别为3、2、1 h，合并滤液，利用旋转                       在漏斗柄处，第 4 刀在漏斗柄与后叶尾极之间 。观察
                                                                                                     [13]
          蒸发仪回收乙醇，得醇提取物（得率为11.57%）和醇提取                        各组大鼠脑组织切片中EB染色情况并拍照。
          残渣（得率为87.92%）。                                      2.5.2 EB 含量测定 脑组织切片拍照后，放入匀浆器
          2.1.2 天麻乙酸乙酯提取物和乙酸乙酯提取残渣 取                          中，加入5 mL 0.5%硫酸钠及丙酮混合液（3∶7，V/V）制成
          天麻醇提取物适量，用3倍水进行溶解，以等体积的乙酸                           匀浆液，密封静置 60 min 以上，3 000 r/min 离心 10 min，


          · 430 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 4                               中国药房  2023年第34卷第4期
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