Page 44 - 《中国药房》2023年4期

为 15 时，15 批独一味总黄酮可聚为 4 类，S1、S3～S9 为 2.4.3 正交偏最小二乘法-判别分析 将15批独一味总
第1类，为青海省和西藏自治区样品；S14、S15为第2类， 黄酮5个共有峰峰面积导入SIMCA-P 14.1软件，通过正
均为云南省样品；S10～S13为第3类，均为四川省样品； 交 偏 最 小 二 乘 法 - 判 别 分 析（orthogonal partial least
S2为第4类，表明15批独一味总黄酮的质量存在一定的 squares-discriminant analysis，OPLS-DA），根据其变量重
差异性，具有明显地域性。 要性投影（variable importance in the projection，VIP）参
数进行分析，结果见图 4。以 VIP 值＞1 作为标准 ，由
[13]
平方欧氏距离
0 5 10 15 20 25 图可知，2、5、3号峰（木犀草苷）VIP值均大于1，表明这3
S5 个成分为导致15批独一味总黄酮差异性的主要成分。
S7
S3
S1 1.6
S4 1.4
1.2
S6 1.0
S8 VIP值 0.8
S9 0.6
0.4
S14 0.2
S15 0
S11 2号峰 5号峰 3号峰 4号峰 1号峰
S12 图4 15批独一味总黄酮OPLS-DA的VIP图
S10
S13
S2 3 讨论
图3 15批独一味总黄酮的聚类分析图 本课题组前期对相关文献 [11，14] 记载的独一味总黄酮
提取方法进行了比较，发现聚酰胺树脂对独一味总黄酮
2.4.2 主成分分析 将 15 批独一味总黄酮色谱图中 5
的吸附、解吸效果优于D-101大孔树脂。在此基础上本
个共有峰的相对峰面积导入SPSS 20.0软件进行主成分
研究结合相关文献考察的洗脱条件提取了 15 批不同产
分析，分析得到的特征值及方差贡献率见表 2。根据特
地独一味的总黄酮，通过紫外分光光度法测定其含量，
征值＞1，共提取到 2 个主成分，包含了样品指纹图谱中
计算得到 15 批独一味总黄酮纯度平均值为 77.72%，表
74.031%的信息。
明15批独一味总黄酮纯度较高，可用于独一味总黄酮指
表2 15批独一味总黄酮的特征值及累计方差贡献率 纹图谱研究。15批独一味总黄酮含量差异较大，可能是
成分 特征值 方差贡献率/% 累计方差贡献率/% 聚酰胺树脂对不同类型黄酮化合物的吸附作用不同以
1 2.568 51.354 51.354 及各批次独一味样品中不同类型黄酮化合物含量有差
2 1.134 22.677 74.031 [15]
3 0.603 12.059 86.090 异造成的 。
4 0.528 10.562 96.652 本研究前期考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2% 甲
5 0.167 3.348 100.000 酸溶液和甲醇-0.2%甲酸溶液4种流动相以及不同流动
为更直观地评价各产地独一味总黄酮的质量，采用 相梯度对独一味总黄酮指纹图谱的影响，以基线平稳、
方差贡献率对15批独一味总黄酮进行综合评价，主成分 色谱峰多且分离好为标准，最终选择了乙腈-0.2% 甲酸
1 和 主 成 分 2 的 得 分 计 算 公 式 分 别 为 ：y1＝0.549x1+ 溶液作为流动相。
0.476x2+0.399x3+0.534x4+0.196x5，y2＝－0.255x1+0.920x2－ 由指纹图谱共有峰相关分析和相似度评价可知，15
0.462x3+0.233x4+0.811x5，其中 y1和 y2代表主成分 1、2 的 批独一味总黄酮的相对峰面积RSD较大，相似度虽然在
得分，x1～x5为 5 个共有峰的峰面积，y1和 y2的各项系数 0.925～1.000之间，但各批次间仍然存在差异。为进一步
明确引起差异性的主要原因，本研究采用聚类分析、主
为主成分1、2的载荷值与特征值开平方的比值；按照公
成分分析和OPLS-DA 3种化学计量学方法对15批独一
式“y＝0.513 54y1+0.226 77y2”计算综合得分（y），y 值越
味总黄酮进行质量评价。聚类分析表明，15批独一味总
高表示独一味总黄酮的质量越好。结果见表3。由综合
黄酮可根据产地聚为4类，表明地域性可引起独一味总
得分排序和聚类分析可知，第 1 类和第 4 类即青海省和
黄酮的质量差异；通过主成分分析进一步得到第1类和
西藏自治区的独一味总黄酮质量较优。
第4类产地即青海省和西藏自治区的独一味总黄酮质量
表3 15批独一味总黄酮主成分分析综合得分表 [16]
较好，与《中国植物志》 记载的独一味主产区一致；通
样品批次 y 1 y 2 y 排名 样品批次 y 1 y 2 y 排名 过 OPLS-DA 筛选出 3 个影响独一味总黄酮质量的主要
S1 0.93 －0.19 0.44 5 S9 1.44 0.03 0.74 1
S2 1.17 0.04 0.61 2 S10 0.80 －0.23 0.36 11 成分，其中1个成分为木犀草苷，也暗示木犀草苷等3个
S3 0.92 －0.19 0.43 6 S11 0.79 －0.27 0.35 12 主要成分的含量高低与独一味总黄酮的质量密切相关。
S4 0.86 －0.23 0.39 9 S12 0.77 －0.26 0.34 13 综上所述，青海省和西藏自治区的独一味总黄酮质
S5 0.97 －0.17 0.46 4 S13 0.82 －0.19 0.38 10 量较好。本研究可为不同产地独一味总黄酮的质量评
S6 0.91 －0.20 0.42 7 S14 0.79 －0.32 0.34 14
S7 0.86 －0.22 0.39 8 S15 0.70 －0.33 0.29 15 价提供参考依据。
S8 1.12 －0.20 0.53 3 （下转第428页）

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