Page 49 - 《中国药房》2023年3期
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苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥           （pH7.5）（B）为流动相进行梯度洗脱（0～13 min，10%A→
          根，主产于我国河南、山东、安徽等地，始记于《神农本草                         23%A；13～23 min，23%A→29%A；23～42 min，29%A→
          经》。苦参性寒、味苦，具有镇痛、抗菌、抗肿瘤等多种功                         48%A；42～50 min，48%A→52%A；50～60 min，52%A→
            [1]
          效 。现代研究发现，苦参主要活性成分为生物碱类和                           60%A；60～65  min，60%A→10%A）；检 测 波 长 为 260
          黄酮类化合物。其中，生物碱类物质包括氧化苦参碱、                           nm；流速为0.8 mL/min；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。
          氧化槐果碱和苦参碱等，均有较好的镇痛、抗肿瘤作用，                          2.2 混合对照品溶液的制备
          尤以苦参碱的作用最为显著；黄酮类物质包括三叶豆紫                             取降苦参酮、苦参酮、三叶豆紫檀苷、氧化槐果碱、
          檀苷、苦参酮和降苦参酮等，其中三叶豆紫檀苷具有较好                          苦参碱、氧化苦参碱对照品各适量，分别置于 10 mL 容
          的抗菌活性，苦参酮和降苦参酮均具有较好的抗肿瘤作                           量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得各对照品贮备液。分
          用 [2―3] 。可见，这些成分可能是苦参的主要活性成分。                      别取适量上述 6 种对照品贮备液，置于同一 10 mL 容量
              随着中药事业的飞速发展，中药质量参差不齐等一                         瓶中，加甲醇稀释并定容，制得上述成分质量浓度分别
          系列问题也日益突显。药材质量对临床用药的安全性                            为 81.6、55.2、67.2、72.3、108.3、84.9 μg/mL 的混合对照
          和有效性有着直接影响。中药指纹图谱可以反映出各                            品溶液。
          种化学成分的整体状态，对评估药材质量优劣、真伪及                           2.3 供试品溶液的制备
          保证其质量的一致性、稳定性具有突出贡献。中药指纹                             取苦参药材粉末（过三号筛）0.5 g，精密称定，放入
                                                             100 mL 锥形瓶中，加入 20 mL 甲醇，称质量；超声（功率
          图谱与化学模式识别分析相结合，可从多个方面评价药
                                                             250 W，频率 40 kHz）提取 30 min，用甲醇补足减失的质
          材质量。常用的化学模式识别分析方法有聚类分析、主
                                                             量，摇匀，离心（8 000 r/min，10 min）；取上清液，于70 ℃
          成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析等                [4―6] 。基于此，
                                                             水浴条件下蒸干，用甲醇复溶至1 mL，摇匀，以0.45 μm
          本研究采用高效液相色谱（HPLC）法建立 12 批苦参药
                                                             微孔滤膜滤过，即得。
          材的指纹图谱，同时，结合3种化学模式识别分析方法对
                                                             2.4 苦参药材HPLC指纹图谱的建立
          影响苦参药材质量的差异性成分进行含量测定，以期为
                                                             2.4.1 精密度试验 取“2.3”项下供试品溶液（编号S1）
          苦参药材质量控制提供依据。
                                                             适量，再按“2.1”项下色谱条件连续进样6次。以10号峰
          1 材料
                                                             为参照（该峰分离度较好、峰面积较大，下同），计算得各
          1.1 主要仪器
                                                             共有峰相对保留时间的 RSD＜0.28%、相对峰面积的
            Waters e2695型HPLC仪及配套的Waters 2998检测
                                                             RSD＜5%（n＝6），表明仪器精密度良好。
          器均购自美国Waters公司；BBA224S-CW型电子天平购
                                                             2.4.2 稳定性试验 取“2.3”项下供试品溶液（编号S1）
          自赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；TGL-16C型离心
                                                             适量，于室温放置0、4、8、12、16、20、24 h时，再按“2.1”项
          机购自上海安亭科学仪器厂；ARIUM-COMFOT-Ⅰ型超纯
                                                             下色谱条件进样分析。以10号峰为参照，计算得各共有
          水一体机购自南京易普易达科技发展有限公司；AP-01P
                                                             峰相对保留时间的 RSD＜0.24%、相对峰面积的 RSD＜
          型真空泵购自天津奥特赛恩斯仪器有限公司；KH-500V
                                                             5%（n＝7），表明该供试品溶液在室温放置 24 h 内稳定
          型超声波清洗器购自昆山禾创超声仪器有限公司。
                                                             性良好。
          1.2 主要药品与试剂
                                                             2.4.3 重复性试验 精密称取苦参药材（编号 S1）粉末
            降苦参酮（批号 DSTDK003001，纯度≥95%）、苦参
                                                            （过三号筛）6份，按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液
          酮对照品（批号 DST200303-020，纯度≥98%）均购自成
                                                             6份，再按“2.1”项下色谱条件进样分析。以10号峰为参
          都德思特生物技术有限公司；三叶豆紫檀苷、氧化槐果
                                                             照，计算得各共有峰相对保留时间的RSD＜0.14%、相对
          碱、苦参碱、氧化苦参碱对照品（批号分别为Y11J11H10-                     峰面积的RSD＜4%（n＝6），表明该方法重复性较好。
          8216、P07M10S82334、T03F9F54046、Y30S6Y17043，纯        2.4.4 指纹图谱的建立与相似度分析 将 12 批苦参药
          度均不低于 98%）均购自上海源叶生物科技有限公司。                         材按“2.3”项下方法制备成供试品溶液，再按“2.1”项下
          本研究所用苦参药材共 12 个批次（编号为 S1～S12，其                     色谱条件进样分析，记录色谱图。将图谱输入《中药色
          中 S1～S7 产自陕西商州区、S8～S10 产自河南伊川县、                    谱指纹图谱相似度评价系统（2012A 版）》，设置编号 S1
          S11～S12 产自内蒙古赤峰市），经南京中医药大学药学                       的样品图谱为参照，采取中位数法，将时间窗宽度设置
          院刘圣金教授鉴定均为豆科植物苦参 S. flavescens Ait.                为0.2，进行多点校正 ，建立苦参药材的HPLC指纹图谱
                                                                               [7]
          的干燥根。                                              和对照指纹图谱 R（见图 1）。结果显示，12 批苦参药材
          2 方法与结果                                            共有17个共有峰，与各单一对照品溶液图谱（见图2）比
          2.1 色谱条件                                           较，指认出峰 1 为氧化苦参碱、峰 2 为氧化槐果碱、峰 10
             以 Agilent  ZORBAX  SB-C18 （250  mm×4.6  mm，5    为苦参碱、峰 14 为三叶豆紫檀苷、峰 16 为苦参酮、峰 17
          μm）为色谱柱；以乙腈（A）-20 mmol/L 磷酸二氢钾溶液                   为降苦参酮。


          中国药房  2023年第34卷第3期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 3    · 299 ·
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