Page 45 - 《中国药房》2023年3期

1 材料 Cur 对照品贮备液，于 4 ℃冰箱中保存。临用前用甲醇
1.1 主要仪器 稀释制成相应质量浓度的标准溶液。（2）大黄素对照品
本研究所用主要仪器有 LC-2010 型高效液相色谱 溶液：精密称取内标大黄素对照品20 mg于100 mL棕色
（HPLC）仪（日本 Shimadzu 公司），XW-80A 型涡旋混合 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓
仪（上海医科大学仪器厂），HWS-24 型电热恒温水浴锅 度为200 μg/mL的内标溶液，于4 ℃避光保存。
（上海一恒科学仪器有限公司），XW-80A型定时恒温磁 2.2.3 组织样品的处理 将大鼠的心、肺、肾和肝剪碎
力搅拌器（上海泸西分析仪器厂），PHS-3C型精密pH计 后，按照称定质量的2倍加入生理盐水匀浆，转移至离心
（上海精密科学仪器有限公司），SZ-100 型纳米粒度仪 管中，以4 000 r/min离心10 min，吸取上清液180 μL，精
（日本 Horiba 公司），AB135 型十万分之一电子天平、 密加入大黄素对照品溶液20 μL、乙酸乙酯-甲醇混合溶
AL204 型万分之一电子分析天平、PL203 型精密电子天 剂（体积比为9∶1）1 mL，涡旋3 min后，以12 000 r/min离
平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]等。 心10 min；小心吸取上层有机溶剂900 μL转移至另一离
1.2 主要药品与试剂 心管中，以氮气吹干，残渣加甲醇 100 μL 复溶，涡旋 2
Cur 对照品、大黄素对照品（内标）均购自中国食品 min，以12 000 r/min离心10 min，取上清液进样测定。
药品检定研究院（批号分别为 110823-201004、110756- 2.2.4 专属性考察 取空白心、肺、肾和肝组织样品，各
200110，纯度均大于98%）；Cur原料药（批号TZSW200317-1， 空白组织+Cur（0.647 5 μg/mL）样品以及大鼠给药后0.5
纯度99.0%）购自西安通泽生物科技有限公司；其余试剂 h的组织样品各适量，按“2.2.3”项下方法处理（空白组织
均为实验室常用规格，水为娃哈哈纯净水。 样品不需要添加内标）后，再按“2.2.1”项下色谱条件进
1.3 动物 样测定，记录色谱图。结果显示，Cur和大黄素的保留时
本研究所用实验动物为SPF级SD大鼠，共90只，雄 间分别约为 10.1、15.0 min，2 个色谱峰互不干扰且峰形
性，体质量220～240 g，由北京维通利华实验动物技术有限 良好，理论板数以 Cur 和大黄素计均不低于 2 000，且各
公司提供，动物生产许可证号为SCXK（京）2019-0006。所 样品中的内源性物质不干扰 Cur 的测定，表明该色谱条
用动物均活动正常且毛发柔顺，摄食、饮水均正常。本 件下专属性良好。结果见图1～图3。
研究获得天津市医药科学研究所伦理委员会批准，伦理 15 15
审批号为IMPS-EAEP-Z-18JCQNJC13500-01。 mAU 10 10
2 方法与结果 5 mAU 5
0
2.1 Cur-SLN混悬液的制备 0
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0
[12]
参考本课题组前期方法制备 Cur-SLN 混悬液 ：称 t/min t/min
取处方量的Cur和硬脂酸，于65 ℃熔化，加入2 mL相同 A.空白心脏组织 B.空白肾组织
50 15
温度的聚山梨酯 80-乙醇溶液（质量比 1∶4）和 8 mL 水， 40 10
涡旋 1 min，即得水包油型微乳。在电磁搅拌（1 020 mAU 30 mAU 5
20
r/min）下，将上述热微乳以每 5 s 1 滴的速度滴入 2 ℃的 10 0
0
分散介质水中，当微乳全部加入后继续以2 ℃保温搅拌 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0
15 min，即得 Cur-SLN 混悬液（每毫升 Cur-SLN 中含 Cur t/min t/min
C.空白肺组织 D.空白肝组织
原料药约 0.77 mg，载药量为 7.72%，包封率为 87.73%）。
图1 空白组织样品的HPLC图
本研究所制 Cur-SLN 的理化性质良好，平均粒径为
50 50
（168.9±1.0） nm，Zeta电位为－（19.60±0.35） mV，多分 40 40
散系数为0.212±0.020。 mAU 30 mAU 30
20
20
2.2 生物样品中Cur含量测定方法的建立 10 Cur 大黄素 10 Cur 大黄素
0 0
采用HPLC法检测大鼠各组织样品中Cur的含量。 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0
2.2.1 色谱条件 以 DIKMA Diamonsil C18 （250 mm× t/min t/min
A.空白心脏组织+Cur+内标 B.空白肾组织+Cur+内标
4.6 μm，5 mm）为色谱柱，以乙腈-0.50% 磷酸溶液（58∶ 50 50
42，V/V）为流动相；检测器为紫外检测器，检测波长为 40 40
30
30
426 nm，流速为 1.0 mL/min，柱温为 35 ℃，进样量为 mAU 20 mAU 20
10 大黄素 10 大黄素
20 μL。 0 Cur 0 Cur
2.2.2 溶液的制备 （1）Cur 对照品贮备液：精密称取 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0
t/min t/min
Cur 对照品 13.21 mg 于 10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶 C.空白肺组织+Cur+内标 D.空白肝组织+Cur+内标
解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为1.321 mg/mL的 图2 空白组织+Cur+内标的HPLC图

中国药房 2023年第34卷第3期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 3 · 295 ·