Page 46 - 《中国药房》2023年3期

50 50 品溶液，各 6 份，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录
40 40
mAU 30 mAU 30 Cur Cur 峰面积（As ）和大黄素（内标）峰面积（Ai ）。另取空白
20
20
大黄素 大黄素 组织样品，同法预处理至氮气吹干，在残渣中加入低、
10 10
Cur
0 0 中、高质量浓度（0.129 5、1.295、32.375 μg/mL）的 Cur 对
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0
t/min t/min 照品贮备液 20 μL，大黄素对照品溶液 20 μL、甲醇 60
A.给药后0.5 h的心脏组织+内标 B.给药后0.5 h的肾组织+内标 μL，涡旋2 min；以12 000 r/min离心10 min，各质量浓度
50 50
40 40 平行6份，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录未经提
Cur
30
30
mAU 20 Cur mAU 20 取的Cur峰面积（As’）和大黄素峰面积（Ai’）。分别计算
大黄素 大黄素
10 10 Cur 和大黄素的提取回收率：Cur 提取回收率（%）＝As/
0 0 As’×100%；大黄素提取回收率（%）＝Ai/Ai’×100%。结
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.0
t/min t/min 果显示，低、中、高质量浓度的Cur在心脏组织中的提取
C.给药后0.5 h的肺组织+内标 D.给药后0.5 h的肝组织+内标
图3 给药后0.5 h各组织样品+内标的HPLC图 回 收 率 分 别 为（89.72±2.13）% 、（92.68±0.74）% 、
（97.31±1.45）%，在肺组织中分别为（91.77±1.86）%、
2.2.5 线性关系、定量下限、检测限的考察 取质量浓 （96.27±1.07）%、（98.11±0.37）%，在肾组织中分别为
度为 1.321 mg/mL 的 Cur 对照品贮备液，用甲醇逐级稀 （90.56±2.64）%、（95.19±0.93）%、（97.81±0.11）%，在
释成质量浓度分别为 1 295.00、647.50、323.75、129.50、 肝 组 织 中 分 别 为（93.80±3.62）% 、（97.77±1.07）% 、
64.75、12.95、6.475、1.295、0.647 5 μg/mL 的系列标准溶 （95.46±3.47）%，RSD 均小于 5%（n＝6）；大黄素在心、
液。分别精密吸取心、肾和肝组织的空白匀浆液 180
肺、肾、肝组织中的提取回收率分别为 95.21%、94.38%、
μL，加入上述系列标准溶液 20 μL，然后按“2.2.3”项下 96.12%、95.72%，RSD 均小于 4%（n＝6），符合生物样品
方 法 处 理 ，即 得 Cur 质 量 浓 度 分 别 为 129.5、64.75、 定量分析的要求 。
[13]
32.375、12.95、6.475、1.295、0.647 5、0.129 5、0.064 75
2.2.8 稳定性试验 按“2.2.3”项下方法制备含 Cur 低、
μg/mL 的系列标准心、肾、肝组织样品溶液。同法精密
中、高质量浓度（0.129 5、1.295、32.375 μg/mL）的组织样
吸取肺组织空白匀浆液，加入 647.50、323.75、129.50、
品溶液，各 3 份，考察其于 25 ℃放置 24 h、－40 ℃放置
64.75、12.95、6.475、1.295、0.647 5 μg/mL 的系列标准溶
液，同前处理，得 Cur 质量浓度分别为 64.75、32.375、 24 h、反复冻融（－40 ℃～室温）3次的稳定性。结果显示，
12.95、6.475、1.295、0.647 5、0.129 5、0.064 75 μg/mL 的 各样品测得质量浓度与理论质量浓度的相对误差（RE）均
[13]
在±15%范围内，提示样品在上述条件下稳定性良好 。
系 列标准肺组织样品溶液。将上述组织样品溶液按
2.3 Cur-SLN在大鼠心、肾、肺、肝组织的分布考察
“2.2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。以组织样
品中Cur的质量浓度（X）为横坐标、Cur与内标的峰面积 2.3.1 分组、给药与样品采集 将大鼠随机分为Cur原
比值（Y）为纵坐标进行线性回归，以线性范围最低值为 料药组和Cur-SLN组，每组45只。于给药前12 h 开始禁
定量下限，以信噪比3∶1计算检测限。结果见表1。 食不禁水，参考文献[14―15]给药方法，两组大鼠分别尾
表1 不同组织中Cur的线性关系、定量下限、检测限的 静脉注射 Cur 原料药混悬液（以含 0.5% 聚山梨酯 80 的
考察结果 生理盐水溶液溶解，临用现配）和 Cur-SLN 混悬液，以
组织 回归方程 线性范围/（μg/mL） r 定量下限/（μg/mL） 检测限/（μg/mL） Cur计注射剂量为25 mg/kg。分别于给药后0.25、0.5、1、
心 Y＝5.230 8X－2.992 3 0.064 75～129.50 0.999 6 0.064 75 0.012 95 2、4、6、8、12、24 h 时，各组分别取 5 只大鼠用乙醚麻醉，
肺 Y＝5.125 3X－1.769 1 0.064 75～64.75 0.998 7 0.064 75 0.012 95 然后处死，解剖分离大鼠的心、肺、肾和肝组织，用生理
肾 Y＝4.727 6X－5.201 1 0.064 75～129.50 0.999 1 0.064 75 0.012 95 盐水将组织表面的残血洗净，定性滤纸吸干后精确称质
肝 Y＝4.702 8X－5.605 1 0.064 75～129.50 0.998 9 0.064 75 0.012 95
量，然后置于离心管内，保存备用。
2.2.6 精密度与准确度试验 取 Cur 对照品适量，加入
空白组织样品溶液，按“2.2.3”项下方法制备含 Cur 定量 2.3.2 Cur-SLN 给药后的组织分布 取给药后不同时
间点各组织样品适量，按“2.2.3”项下方法处理后，再按
下限质量浓度的组织样品溶液以及含Cur低、中、高质量
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并代入标准
浓度（0.129 5、1.295、32.375 μg/mL）的组织样品溶液，每
个质量浓度平行制备6份。按“2.2.1”项下色谱条件进样 曲线计算不同时间点各组织样品中 Cur 的含量。采用
分析，以实测质量浓度与理论质量浓度进行比较，考察 SPSS 17.0 软件对数据进行统计分析，数据均以 x±s 表
各样品中Cur质量浓度的日内精密度和准确度；连续3 d 示，组间比较采用 t 检验。检验水准 α＝0.05。结果显
进样，考察批间精密度和准确度。结果显示，各样品日 示，与Cur原料药相应组织样品组比较，Cur-SLN组大鼠
内、日间 RSD 均小于 15%（n＝6），准确度均值在标示值 心、肾、肺（0.25～24 h 各时间点）和肝（0.25～1 h、12～
[13]
的±15%之内，符合生物样品定量分析的要求 。 24 h 各时间点）组织样品中 Cur 的含量均显著升高（P＜
2.2.7 提取回收率 按“2.2.3”项下方法配制含 Cur 低、 0.05 或 P＜0.01）；而肝（2～8 h 各时间点）组织样品中
中、高质量浓度（0.129 5、1.295、32.375 μg/mL）的组织样 Cur的含量则显著降低（P＜0.01）。结果见表2。

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