Page 78 - 《中国药房》2022年23期

0 h

24 h

对照组 DOX组 MSNs-SS-NH 2 @DOX组 CLs@DOX组 CLMSNs-SS-NH 2 @DOX组 CLMSNs-SS-NH 2 @DOX/siRNA组
图5 各组MCF-7/ADR细胞的迁移情况

2.4.3 细胞凋亡的考察 将 MCF-7/ADR 细胞以 2×10 4 10 6 10 6
个/孔接种于 6 孔板，按“2.4.2”项下方法分组与给药，每 10 5 10 5
10 4 10 4
组设 3 个复孔。继续培养 24 h 后收集细胞沉淀，加入
500 µL 结合液重悬均匀，分别加入 5 µL Annexin Ⅴ- PI-A 10 3 PI-A 10 3
10 2 10 2
FITC 和碘化丙啶（PI）染色液，室温孵育 10 min 后，采用
10 1 10 1
流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果显示，培养
10 0 10 0
24 h 后 ，对 照 组 MCF-7/ADR 细 胞 的 总 凋 亡 比 例 为 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6
FITC-A
FITC-A
（10.19±0.56）%，其余各组 MCF-7/ADR 细胞的总凋亡 A. 对照组 B. DOX组
10 6 10 6
比例[分别为（18.84±0.25）%、（18.84±0.45）%、（24.86±
10 5 10 5
0.75）%、（30.55±1.08）%、（40.90±0.78）%]较对照组均
10 4 10 4
显著升高（P＜0.05），且 CLMSNs-SS-NH2@DOX/siRNA PI-A 10 3 PI-A 10 3
组细胞总凋亡比例最高，表明 CLMSNs-SS-NH2@DOX/ 10 2 10 2
siRNA可促进MCF-7/ADR细胞凋亡。结果见图6。 10 1 10 1
2.4.4 细胞周期的考察 将 MCF-7/ADR 细胞以 2×10 4 10 0 10 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6
个/孔接种于 6 孔板中，按“2.4.2”项下方法分组与给药， FITC-A FITC-A
C. MSNs-SS-NH 2@DOX组 D. CLs@DOX组
每组设3个复孔。继续培养24 h后收集细胞沉淀，以磷
10 6 10 6
酸盐缓冲液洗涤 1～2 次后，于 4 ℃条件下以 1 mL 75% 10 5 10 5
乙醇固定过夜；离心弃上清液，以磷酸盐缓冲液洗涤 2 10 4 10 4
次，加入 500 µL PI 染色液，于 37 ℃避光培养 30 min 后， PI-A 10 3 PI-A 10 3
采用流式细胞仪检测各组细胞周期。结果显示，培养 10 2 10 2
24 h 后，对照组 MCF-7/ADR 细胞 G0/G1 期所占比例为 10 1 10 1
（21.00±0.65）%，其余各组 MCF-7/ADR 细胞 G0/G1期所 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6
FITC-A FITC-A
占 比 例 [ 分 别 为（35.40±1.12）% 、（37.85±0.95）% 、 E. CLMSNs-SS-NH 2@DOX组 F. CLMSNs-SS-NH 2@DOX/siRNA组
（42.33±1.37）% 、（45.50±0.57）% 、（63.90±2.37）% ] 较 图6 各组MCF-7/ADR细胞的凋亡流式细胞图
对 照 组 均 显 著 升 高（P＜0.05），且 CLMSNs-SS-
NH2@DOX/siRNA 组细胞 G0/G1期所占比例最高，表明 置于冰上裂解 15 min，提取总蛋白。蛋白经变性后，进
CLMSNs-SS-NH2@DOX/siRNA 可将 MCF-7/ADR 细胞 行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，室温封
的生长周期明显阻滞于 G0/G1期，以增强逆转肿瘤细胞 闭，加入P-gp抗体（稀释度为1∶1 000），4 ℃孵育18 h；常
MDR的效果。 温闭光孵育二抗（稀释度为 1∶15 000）1 h，洗膜；采用双
2.4.5 细胞中P-gp表达的考察 将MCF-7/ADR细胞以 色红外激光成像系统显色，以 GAPDH 作为内参，采用
4
2×10 个/孔接种于6孔板中，按“2.4.2”项下方法分组与 Image J 1.48v 软件分析目的蛋白灰度值，以目的蛋白条
给药，每组设3个复孔。继续培养24 h后收集细胞沉淀， 带与内参蛋白条带的灰度值比值表示目的蛋白的表达

· 2884 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 23 中国药房 2022年第33卷第23期