Page 82 - 《中国药房》2022年23期
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胶电泳，反应后分析基因扩增的循环阈值（Ct 值）。                           2.5 临床疗效评价
          SIRT1 引物序列（5′→3′）：上游引物 TGATTGGCACA-                     患者出院后对口服低剂量 VPA 治疗 3 个月、治疗 3
          GATCCTCGAA，下游引物 AAGTCTACAGCAAGGCG-                  个月后癫痫控制无效增加药物剂量再治疗3个月的癫痫

          AGC；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）引物序列（5′→                      患者进行临床疗效评价。3个月内癫痫完全控制或发作
          3′）：上游引物 TGTGTCCGTCGTGGATCTGA，下游引                   次数减少＞75% 视为显效，发作次数减少 50%～75% 视
          物 CCTGCTTCACCACCTTCTTGA。 实 时 荧 光 定 量                为有效，发作次数减少 25%～＜50% 视为疗效差，发作
          PCR 反应条件：95 ℃ 3 min 预变性，然后按 95 ℃ 30 s，              次数减少＜25% 或发作加重视为无效 。有效控制率
                                                                                               [18]
          56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共40次循环。以GAPDH为内参，              （%）＝（显效例数+有效例数）/总例数×100%，无效控制
          以2 －ΔΔCt 计算SIRT1 mRNA的相对表达水平。                       率（%）＝（疗效差例数+无效例数）/总例数×100%。总
          2.3 分组与给药                                           有效控制率（%）＝[（显效例数+有效例数） 治疗组+（显效例
              以 SIRT1 mRNA 相对表达水平低于基线的癫痫患                     数+有效例数） 加量组]/总例数×100%。
          者作为SIRT1低表达治疗组，高于基线的癫痫患者作为                          2.6 肝功能指标检测
          SIRT1高表达治疗组。                                            采用全自动生化分析仪检测治疗前、口服低剂量
              根据患者实际使用药品情况，本研究中患者使用的                          VPA 治疗 3 个月、治疗 3 个月后癫痫控制无效增加药物
          VPA包括本院开具的和患者院外自带药品，经统计分别                           剂量再治疗3个月的癫痫患者的肝功能。丙氨酸转氨酶
          来自湖南省湘中制药有限公司（本院药品）、山东方明药                          （alanine aminotransferase，ALT）的参考范围为 10.00～
          业股份有限公司（院外自带）、山东仁和制药有限公司                            35.00 U/L，天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，
         （院外自带）。通过查阅有关文献，上述3种VPA均符合                           AST）的参考范围为 8.00～40.00 U/L，总胆红素（total
                                        [17]
          一致性评价，临床疗效无明显差异 。根据药品说明书
                                                              bilirubin，TBIL）的参考范围为1.70～21.00 μmol/L。
          内容，3种VPA的用药方案一致。因此本研究的给药方
                                                              2.7 统计学方法
          案为：SIRT1低、高表达组患者出院后，参照药品说明书，
                                                                  采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析。计量资
          口服低剂量VPA（12 mg/kg或每日约600 mg）治疗，用药
                                                              料以 x±s 表示，两组间比较采用两独立样本 t 检验。检
          后分别作为 SIRT1 低表达治疗组和 SIRT1 高表达治疗
                                                              验水准α＝0.05。
          组；并于用药1周后监测两组患者的血药浓度，调整VPA
                                                              3 结果
          血药浓度在有效范围内。治疗3个月后，所有患者回院
                                                              3.1 癫痫患者治疗前SIRT1 mRNA相对表达水平检测
          复查 VPA 血药浓度，评价治疗 3 个月的临床疗效（临床
                                                              结果
          疗效评价标准见“2.5”项下）。若患者临床疗效为无效，
                                                                  治疗前，54 例患者中有 31 例患者的 SIRT1 mRNA
          则增加 VPA 剂量至 15 mg/kg 或每日约 800 mg，此部分
                                                              相对表达水平低于基线值，有23例患者高于基线值。与
          患者作为 SIRT1 低表达加量组和 SIRT1 高表达加量组。
                                                              健康者 SIRT1 表达组相比，SIRT1 低表达治疗组治疗前
          继续治疗 3 个月后，加量组患者回院复查 VPA 血药浓
                                                              SIRT1 mRNA 相对表达水平显著降低，SIRT1 高表达治
          度，评价其增加剂量治疗3个月的临床疗效。
                                                              疗组显著增加，结果见图1。
          2.4 血药浓度检测
                                                                                       b
              患者出院后对口服低剂量 VPA 治疗 3 个月、治疗 3                               6
          个月后癫痫控制无效增加药物剂量再治疗3个月的癫痫
          患者进行血药浓度检测。患者出院后，口服VPA，每3个                                     4
          月复查1次，血液样本采集后，于室温条件下24 h内完成                                 SIRT1 mRNA相对表达水平  a
          检测；若样本在 24 h 内不能及时检测，其在 4 ℃冷藏保                                 2
          存不可超过7 d，－20 ℃以下冷冻保存不可超过1个月；
          样本检测前需要恢复至室温，冷冻保存的样本需要完全
          融化、复温、混合均匀后使用（切忌反复冻融）。采用干                                      0  健康者SIRT1  SIRT1低表  SIRT1高表
                                                                              表达组    达治疗组    达治疗组
          式荧光免疫分析仪监测患者的血药浓度。血液样本离
                                                                 a：SIRT1低表达治疗组与健康者SIRT1表达组比较，P＜0.05；b：
          心后，取 10 μL 血清，加入 VPA 检测试剂盒充分混匀得                     SIRT1高表达治疗组与健康者SIRT1表达组比较，P＜0.05
          稀释液，取80 μL稀释液加入试剂卡中孵育15 min，检测                      图1 癫痫患者治疗前 SIRT1 mRNA 相对表达水平比
          血药浓度。VPA检测结果的参考区间参考文献[15]。                               较（x±s）


          · 2888 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 23                            中国药房  2022年第33卷第23期
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