Page 25 - 《中国药房》2022年20期

发光底物显色后，置于凝胶成像系统下曝光成像并使 见表2。
用 Image J 1.53 e软件进行分析，以目标蛋白与内参蛋白 3.3 三叶香茶菜提取物对 2 种细胞中 TLR4/NF-κB/
的灰度值比值表示目标蛋白的表达水平。实验重 NLRP3通路相关基因表达的影响
复3次。 与空白对照组比较，LPS模型组肝星状细胞和肝细
2.6 统计学方法 胞中 TLR4、NF-κB p65、NLRP3、GSDMD、ASC mRNA
采用SPSS 26.0软件对数据进行统计分析。数据均 的表达均显著上调（P＜0.05），IκBα mRNA 的表达均显

以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两 著下调（P＜0.05）。与LPS模型组比较，各药物组2种细
两比较采用LDS-t检验。检验水准α＝0.05。
胞中 TLR4、NF-κB p65、NLRP3、GSDMD、ASC mRNA
3 结果
的表达均显著下调（P＜0.05），IκBα mRNA 的表达均显
3.1 三叶香茶菜提取物对2种细胞增殖的影响
著上调（P＜0.05）。与 TLR4 阻断剂组比较，TLR4 阻断
随着三叶香茶菜提取物质量浓度的增加，肝星状细
剂+三叶香茶菜提取物组2种细胞中TLR4、NF-κB p65、
胞和肝细胞的增殖抑制率均逐渐降低，提取物对上述 2
NLRP3、GSDMD、ASC mRNA 的表达均显著下调（P＜
种细胞的IC50分别为1.66、1.88 mg/mL。因此，在不影响
0.05），IκBα mRNA 的表达均显著上调（P＜0.05）；而三
细胞增殖活力的前提下，本研究选择 1 mg/mL（此质量
叶香茶菜提取物组上述指标与 TLR4 阻断剂组比较，差
浓度下，该提取物对 2 种细胞的增殖抑制率分别约为
异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见表3。
65%、71%）作为后续实验中三叶香茶菜提取物的干预
3.4 三叶香茶菜提取物对 2 种细胞中 TLR4/NF-κB/
浓度。
NLRP3通路相关蛋白表达的影响
3.2 三叶香茶菜提取物对 2 种细胞上清液中纤维因子
与空白对照组比较，LPS模型组肝星状细胞和肝细
和炎症因子含量的影响
胞中 TLR4、p-IκBα、NF-κB p65、NLRP3、GSDMD、ASC
与空白对照组比较，LPS模型组肝星状细胞上清液
蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）。与 LPS 模型组
中TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量和肝细胞上清
液 中 ALT、AST、IL-1β、IL-18 含 量 均 显 著 升 高（P＜ 比较，各药物组2种细胞中上述蛋白的表达水平均显著
0.05）；与 LPS 模型组比较，各药物组上述指标含量均显 降低（P＜0.05）。与TLR4阻断剂组比较，TLR4阻断剂+
著降低（P＜0.05）。与 TLR4 阻断剂组比较，TLR4 阻断 三叶香茶菜提取物组 2 种细胞中 TLR4、p-IκBα（肝星状
剂+三叶香茶菜提取物组细胞上清液中 TGF-β1、α- 细胞除外）、NF-κB p65、NLRP3、GSDMD、ASC 蛋白的
SMA、COL-Ⅲ和 ALT、AST、IL-1β、IL-18 含量均显著降 表达水平均显著降低（P＜0.05）；而三叶香茶菜提取物
低（P＜0.05）；而三叶香茶菜提取物组上述指标与TLR4 组上述指标与 TLR4 阻断剂组比较，差异均无统计学意
阻断剂组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果 义（P＞0.05）。结果见表4、图1。
表2 三叶香茶菜提取物对2种细胞上清液中纤维因子和炎症因子含量的影响（x±s，n＝3）
肝星状细胞 肝细胞
组别
TGF-β 1/（ng/mL） α-SMA/（pg/mL） COL-Ⅰ/（ng/mL） COL-Ⅲ/（pg/mL） ALT/（pg/mL） AST/（ng/mL） IL-1β/（pg/mL） IL-18/（pg/mL）
空白对照组 4.08±0.51 6.38±1.42 1.58±0.25 266.88±37.12 635.89±126.58 1.25±0.28 6.81±1.29 33.47±4.96
LPS模型组 23.43±4.52 a 68.18±14.11 a 5.01±0.98 a 671.71±93.79 a 2 306.14±369.98 a 5.26±0.89 a 26.20±4.55 a 92.86±14.04 a
秋水仙碱组 14.38±2.67 b 39.64±8.84 b 3.46±0.55 b 476.75±64.00 b 1 553.16±262.80 b 3.46±0.61 b 17.16±2.89 b 64.83±9.31 b
三叶香茶菜提取物组 12.02±1.88 b 32.65±6.45 b 3.09±0.44 b 434.92±56.82 b 1 375.39±212.38 b 3.05±0.51 b 15.26±2.79 b 57.87±8.53 b
TLR4阻断剂组 11.19±1.52 b 30.04±5.01 b 2.83±0.38 b 430.08±55.59 b 1 326.68±186.49 b 2.92±0.45 b 14.83±2.65 b 57.36±7.72 b
TLR4阻断剂+三叶香茶菜提取物组 6.47±1.05 bc 14.63±3.11 bc 2.10±0.22 b 298.57±42.67 bc 879.14±138.04 bc 1.85±0.32 bc 8.41±1.85 bc 38.03±6.17 bc
a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与LPS模型组比较，P＜0.05；c：与TLR4阻断剂组比较，P＜0.05
表3 三叶香茶菜提取物对2种细胞中TLR4/NF-κB/NLRP3通路相关基因表达的影响（x±s，n＝3）
肝星状细胞 肝细胞
组别
TLR4 mRNA IκBα mRNA NF-κB p65 mRNA NLRP3 mRNA GSDMD mRNA ASC mRNA TLR4 mRNA IκBα mRNA NF-κB p65 mRNA NLRP3 RNA GSDMD mRNA ASC mRNA
空白对照组 1.01±0.16 1.01±0.18 1.01±0.12 1.01±0.18 1.02±0.18 1.01±0.15 1.01±0.13 1.01±0.14 1.01±0.1 1.01±0.16 1.01±0.17 1.01±0.17
LPS模型组 5.21±0.67 a 0.69±0.09 a 4.96±0.53 a 5.54±0.44 a 5.35±0.70 a 4.92±0.72 a 5.54±0.54 a 0.63±0.07 a 5.07±0.59 a 4.95±0.54 a 5.66±0.56 a 5.14±0.54 a
秋水仙碱组 2.97±0.48 b 1.17±0.16 b 2.69±0.34 b 3.72±0.49 b 3.66±0.48 b 2.31±0.30 b 3.15±0.51 b 0.97±0.16 b 2.93±0.48 b 3.08±0.32 b 3.77±0.44 b 3.33±0.67 b
三叶香茶菜提取物组 3.00±0.35 b 1.18±0.17 b 2.42±0.30 b 3.53±0.63 b 3.45±0.48 b 2.39±0.34 b 3.21±0.41 b 0.99±0.17 b 2.99±0.51 b 2.92±0.36 b 3.47±0.50 b 3.27±0.47 b
TLR4阻断剂组 3.00±0.38 b 1.12±0.17 b 2.45±0.31 b 3.40±0.42 b 3.48±0.43 b 2.36±0.35 b 3.33±0.49 b 1.00±0.17 b 3.04±0.53 b 3.00±0.45 b 3.58±0.43 b 3.11±0.46 b
TLR4阻断剂+三叶香茶菜提取物组 0.97±0.18 bc 1.78±0.23 bc 1.05±0.15 bc 1.02±0.18 bc 1.07±0.16 bc 1.03±0.20 bc 1.11±0.17 bc 1.90±0.27 bc 1.08±0.17 bc 1.13±0.17 bc 1.04±0.15 bc 1.08±0.18 bc
a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与LPS模型组比较，P＜0.05；c：与TLR4阻断剂组比较，P＜0.05

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2451·