Page 23 - 《中国药房》2022年20期

GSDMD，ASC in the above cells were determined. RESULTS Compared with LPS model group，the contents of TGF-β1，α-SMA，
COL-Ⅰ and COL-Ⅲ in the supernatant of hepatic stellate cells and the contents of ALT，AST，IL-1β and IL-18 in the supernatant
of hepatocytes were significantly decreased；the mRNA expressions of TLR4，NF- κB p65，NLRP3，GSDMD，ASC and the
protein expressions of TLR4，p-IκBα，NF-κB p65，NLRP3，GSDMD，ASC in the two kinds of cells were significantly down-
regulated，and the mRNA expression of IκBα was significantly up-regulated in all administration groups（P＜0.05）. Compared
with TLR4 inhibitor group，the improvement of most of above indexes was more significant in the TLR4 inhibitor+I. ternifolius
extract group （P＜0.05）. CONCLUTIONS I. ternifolius extract could inhibit the activation of TLR4/NF- κB/NLRP3 pathway，
reduce the release of fibrosis factors and inflammatory factors，alleviate the inflammatory injury of liver cells，and inhibit the
activation of hepatic stellate cells，so as to protect liver cells and resist liver fibrosis.
KEYWORDS Isodon ternifolius extract；hepatic stellate cells；hepatocytes；TLR4/NF-κB/NLRP3 pathway；hepatic fibrosis；
inflammatory reaction

三叶香茶菜 Isodon ternifolius（D.Don）Kudo 为唇形 5200型凝胶成像系统（上海天能科技有限公司）等。
科植物，又名细叶香茶菜，常用于治疗黄疸、风湿肿痛 1.2 主要药品与试剂
等，其复方制剂可用于临床治疗急慢性肝炎 [1―2] 。有研 三叶香茶菜饮片（批号20190501，产地广西）于2019
究表明，三叶香茶菜乙醇提取物具有保肝、降酶活性，其 年10月购自广西仙茱中药科技有限公司，由广西中医药
主要药效成分为齐墩果酸和熊果酸 [3―4] 。另有研究发 大学药用植物学教研室梁子宁教授鉴定为唇形科植物
现，三叶香茶菜的多种苯基木脂素成分可减少小鼠巨噬 三叶香茶菜I. ternifolius（D.Don）Kudo的干燥根茎。
细胞 RAW264.7 的炎性损伤，可能是其药效成分之一 。 TAK-242 对照品（TLR4 阻断剂，批号 SML0832，纯
[5]
动物实验表明，三叶香茶菜能减轻四氯化碳致大鼠肝纤 度≥98%）、秋水仙碱对照品（阳性对照，批号 C3915，纯
维化（hepatic fibrosis，HF）程度，下调 Toll 样受体 4（Toll- 度≥95%）均购自美国 Sigma 公司；脂多糖（LPS，批号
like receptor 4，TLR4）、核因子 κB（nuclear factor-κB， L8880）、MTT 细 胞 增 殖 及 毒 性 检 测 试 剂 盒（批 号
NF-κB）、磷酸化核因子 κB 抑制蛋白（phosphorylated M1020）均购自北京索莱宝科技有限公司；ECL 化学发
inhibitor of NF-κB，p-IκB）、NOD 样受体蛋白 3（NOD- 光底物（批号 BL523A）购自北京兰杰柯科技有限公司；
like receptor protein 3，NLRP3）的表达，减少白细胞介素 IL-1β、IL-18、Ⅰ型胶原蛋白（type Ⅰ collagen，COL-Ⅰ）、
1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子 α COL-Ⅲ、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）
（tumor necrosis factor-α，TNF-α）等炎症因子的释放，提 酶 联 免 疫 吸 附 测 定（ELISA）试 剂 盒（批 号 分 别 为
示其可通过抑制 TLR4/NF-κB/NLRP3 通路来减轻大鼠 JYM0419Ra、JYM0650Ra、JYM0413Ra、JYM0811Ra、
的炎性损伤，从而发挥抗 HF 作用 [6―7] 。有研究指出， JYM0722Ra、JYM0994Ra）均购自武汉基因美生物科技
NLRP3炎症小体可诱导肝细胞死亡，并可在细胞外被肝 有 限 公 司 ；α -SMA、转 化 生 长 因 子 β1（transforming
星状细胞吞噬，从而激活肝星状细胞，使得 IL-1β、α-平 growth factor-β1，TGF-β1 ）ELISA 试剂盒（批号分别为
滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）分泌上 ml038078、ml002856）均购自上海酶联生物科技有限公
[8]
调，进而加重 HF ，提示肝星状细胞和肝细胞所构成的 司；兔源TLR4、NF-κB p65、NLRP3、Gasdermin D（GSDMD）、
肝脏微环境在HF的发展过程中发挥了重要作用。基于 凋亡相关微粒蛋白（apoptosis-associated speck-like pro‐
此，本研究在前期体内实验的基础上，以 TLR4/NF-κB/ tein containing CARD，ASC）、β-肌动蛋白（β-actin）单克
NLRP3通路为切入点，探讨三叶香茶菜提取物对肝星状 隆 抗 体（批 号 分 别 为 ab13867、ab76302、ab263899、
细胞和肝细胞的影响，进一步揭示其抗HF的分子机制。 ab219800、ab180799、ab8227）和辣根过氧化物酶标记的
1 材料 山羊抗兔 IgG 二抗（批号 ab6721）均购自英国 Abcam 公

1.1 主要仪器 司；兔源p-IκBα单克隆抗体（批号2859S）购自美国CST
本研究所用主要仪器包括CC-170T-8型三气培养箱 公司；其余试剂均为实验室常用规格，水为纯净水。
（新加坡 ESCO 公司）、FilterMax F3 型多功能酶标仪[美 1.3 实验动物与细胞
谷分子仪器（上海）公司]、FC-1100型超微量核酸检测仪 SPF 级雄性 SD 大鼠，体质量为 180～200 g，购自湖
（杭州遂真生物技术有限公司）、AriaMx型实时聚合酶链 南斯莱克景达实验动物有限公司，动物生产许可证号为
反应（real-time PCR）系统（美国 Agilent 公司）、Tanon SCXK（湘）2019-0004。所有动物均饲养于广西中医药

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2449·