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表4 三叶香茶菜提取物对2种细胞中TLR4/NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达的影响（x±s，n＝3）
肝星状细胞 肝细胞
组别
TLR4 p-IκBα NF-κB p65 NLRP3 GSDMD ASC TLR4 p-IκBα NF-κB-p65 NLRP3 GSDMD ASC
空白对照组 0.58±0.16 0.72±0.10 0.40±0.08 0.96±0.16 0.58±0.11 0.40±0.10 0.70±0.12 0.54±0.09 0.25±0.05 0.50±0.10 0.35±0.06 0.47±0.09
LPS模型组 1.37±0.24 a 1.51±0.24 a 1.53±0.27 a 2.19±0.46 a 1.42±0.26 a 1.16±0.24 a 1.63±0.30 a 1.16±0.15 a 1.02±0.18 a 1.22±0.28 a 0.97±0.19 a 1.03±0.10 a
秋水仙碱组 0.94±0.17 b 1.12±0.19 b 0.96±0.13 b 1.37±0.20 b 0.87±0.17 b 0.71±0.18 b 0.96±0.23 b 0.76±0.10 b 0.54±0.11 b 0.78±0.16 b 0.55±0.20 b 0.68±0.08 b
三叶香茶菜提取物组 0.92±0.16 b 1.05±0.15 b 0.91±0.13 b 1.27±0.27 b 0.84±0.18 b 0.73±0.16 b 1.11±0.26 b 0.80±0.10 b 0.71±0.14 b 0.80±0.15 b 0.68±0.18 b 0.72±0.11 b
TLR4阻断剂组 0.91±0.12 b 0.98±0.15 b 0.93±0.11 b 1.26±0.29 b 0.83±0.16 b 0.63±0.12 b 1.11±0.15 b 0.74±0.10 b 0.73±0.16 b 0.78±0.12 b 0.64±0.13 b 0.68±0.10 b
TLR4阻断剂+三叶香茶菜提取物组 0.54±0.11 bc 0.75±0.09 b 0.44±0.06 bc 0.76±0.12 bc 0.41±0.08 bc 0.34±0.05 bc 0.61±0.12 bc 0.53±0.09 bc 0.29±0.05 bc 0.49±0.10 bc 0.34±0.05 bc 0.38±0.05 bc
a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与LPS模型组比较，P＜0.05；c：与TLR4阻断剂组比较，P＜0.05
TLR4 90 kDa 在肝细胞与肝星状细胞组成的微环境中，濒死的肝
p-IκBα 40 kDa 细胞会触发先天免疫系统，激活无菌性炎症反应，从而
[19]
NLRP3 65 kDa 对邻近肝细胞造成进一步损伤并激活肝星状细胞 。
NF-κB p65 118 kDa 有证据表明，从死亡肝细胞中释放的物质可作为肝星状
GSDMD 53 kDa
细胞激活和分化的重要介质，从而上调TGF-β1和COL-Ⅰ
ASC 22 kDa [20]
的分泌 。研究表明，LPS 可通过刺激肝细胞、激活
β-actin 42 kDa
NF-κB 通路来促进肝细胞中 NLRP3、IL-1β、IL-18 的表
A B C D E F A B C D E F
[21]
肝星状细胞 肝细胞 达 ，上述炎症因子可激活肝星状细胞，促进胶原沉积，
A：空白对照组；B：LPS模型组；C：秋水仙碱组；D：三叶香茶菜提 从而加重HF 。本研究结果显示，三叶香茶菜提取物能
[8]
取物组；E：TLR4阻断剂组；F：TLR4阻断剂+三叶香茶菜提取物组
降低肝细胞上清液中ALT、AST、IL-1β、IL-18的含量，表
图1 三叶香茶菜提取物对 2 种细胞中 TLR4/NF-κB/
明其能减轻肝细胞的炎性损伤。
NLRP3通路相关蛋白表达影响的电泳图
有研究指出，TLR4/NF-κB/NLRP3是一条重要的炎
4 讨论 症反应通路，TLR4 与 LPS 结合可活化其下游 IκB 激酶，
本研究在前期动物实验的基础上，采用原代肝星状 使 IκBα 磷酸化后降解，从而激活 NF-κB，促进 NLRP3、
细胞和原代肝细胞进行体外实验，研究三叶香茶菜提取 ASC 和胱天蛋白酶 1 前体表达并组装形成 NLRP3 炎症
物对TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响，以进一步揭示其 小体，活化的 NLRP3 炎症小体可促进细胞焦亡关键蛋
抗 HF 的分子机制。研究表明，肝星状细胞和肝细胞所 白GSDMD活化、成熟，使细胞肿胀、裂孔而释放IL-1β、
构成的肝脏微环境直接影响 HF 的进展，肝细胞通常是 IL-18 等炎症因子，最终造成肝星状细胞或肝细胞受
损伤的初始目标，随后通过与肝星状细胞间的相互作用 损 [22―23] 。经 LPS 刺激后，肝星状细胞可通过 TLR4 信号
（包括炎症反应和再生反应）来直接或间接激活肝星状 转导和 NF-κB 活化而被激活，分泌 TGF-β1、α-SMA、
细胞，促进细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的合 COL-Ⅰ、COL-Ⅲ等因子，从而促进HF的发展；经LPS刺
成、分泌 [8，13] 。因此，本研究采用原代肝星状细胞和原代 激后，肝细胞的 TLR4 被激活，使 IL-1β、IL-18 等炎症因
肝细胞开展体外实验。 子分泌增加，从而造成炎性损伤 [24―25] 。此外有研究表
ECM 沉积是 HF 的主要特征，也是该症的主要驱动 明，NLRP3炎症小体可诱导肝细胞死亡并释放至细胞外
因素 。胶原蛋白是 ECM 的主要结构性纤维不溶性蛋 被肝星状细胞吞噬，导致 IL-1β 和 α-SMA 分泌的增加，
[14]
[15]
白，也是 ECM 的主要成分 。TGF-β1在多种纤维化疾 从而加重HF 。本研究结果显示，三叶香茶菜提取物能
[8]
病（含HF）中起核心作用，能激活肝星状细胞，促进ECM 下调肝星状细胞和肝细胞中TLR4、NF-κB p65、NLRP3、
产生、沉积，从而导致 HF 的形成 [16―17] 。在肝损伤期间， GSDMD、ASC mRNA 的表达，上调 IκBα mRNA 的表
肝星状细胞被激活并转化为表达α-SMA的收缩性肌成 达，并可降低TLR4、p-IκBα、NF-κB p65、NLRP3、GSDMD、

纤维细胞，导致血管变形和血管阻力增加，从而引发门 ASC 蛋白的表达，降低肝星状细胞上清液中 TGF-β1、
[18]
静脉高压，可见抑制 α-SMA 可减缓 HF 的进展 。本研 α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的含量和肝细胞上清液中 IL-
究结果显示，三叶香茶提取物能降低肝星状细胞上清液 1β、IL-18 的含量，提示三叶香茶菜提取物可通过抑制
中 TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的含量，表明其可 TLR4/NF-κB/NLRP3 通路活化来减轻肝细胞的炎性损
抑制TGF-β1活化，从而使肝星状细胞转化为收缩性肌成 伤，抑制肝星状细胞的活化，减少纤维因子的合成分泌。
纤维细胞的途径受阻，最终抑制了 COL-Ⅰ、COL-Ⅲ等 此外，本课题组前期动物实验研究表明，作为阳性
ECM成分的分泌。 对照的秋水仙碱可明显减轻大鼠 HF 程度，本研究结果

·2452· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 中国药房 2022年第33卷第20期