Page 54 - 《中国药房》2022年18期
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基于TLR4/MyD88/NF-кB信号通路研究十一方药酒对兔膝骨关
节炎的保护作用
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张文涛 ，周玲梅 ，黄宏海 ，鲍慧慧 ，毛德文 ，田 慧 ，刘舒凌（1.广西中医药大学教学实验实训中心，南宁
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530200；2.广西中医药大学药学院，南宁 530200；3.广西中医药大学第一附属医院肝病科，南宁 530023）
中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）18-2224-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.18.10
摘 要 目的 研究十一方药酒（以下简称“SYF”）对木瓜蛋白酶诱导的兔膝骨关节炎（KOA）的保护作用及机制。方法 将35只
兔随机分为空白组、模型组、阳性组（双氯芬酸二乙胺乳胶剂200 mg/kg）、SYF高剂量组（386 mg/kg）、SYF低剂量组（97 mg/kg），每
组 7 只（均为雄性4只、雌性3只）。除空白组外，其余各组兔于第 1、4、7天从右后肢膝关节腔注入木瓜蛋白酶混合液（含2%木瓜
蛋白酶与0.03 mol/L L-半胱氨酸）0.5 mL复制KOA模型，空白组注射等体积生理盐水。从第15天开始于各组兔右后肢膝关节涂
抹药物，每天给药2次，连续20 d，同时在第0、8、14、35天，用游标卡尺测量兔右后肢膝关节直径计算其肿胀度。实验结束后，采用
酶联免疫吸附测定法检测滑膜组织白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、前列腺素E2 （PGE2 ）的水平；制作滑膜组织苏
木精-伊红（HE）染色切片，观测病理学形态变化；采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测滑膜组织Toll样受体4（TLR4）/髓样分化
因子88（MyD88）/细胞核因子（NF-кB）信号通路中TLR4、MyD88、NF-кB p65 mRNA相对表达水平；采用Western blot法检测滑膜
组织TLR4、MyD88、NF-кB p65、磷酸化NF-кB p65（p-NF-кB p65）蛋白相对表达水平。结果 与空白组比较，模型组兔膝关节肿胀
度升高，滑膜组织病理性损伤严重，滑膜组织中IL-1β、TNF-α、PGE2水平均显著升高（P＜0.05），TLR4、MyD88、NF-кB p65 mRNA
和TLR4、MyD88、p-NF-кB p65蛋白相对表达水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组兔右后肢膝关节肿胀度与滑膜
组织病理损伤程度均有显著改善，滑膜组织中 IL-1β、TNF-α、PGE2水平均显著降低（P＜0.05），TLR4、MyD88、NF-кB p65 mRNA
相对表达水平和TLR4、MyD88（SYF低剂量组除外）、p-NF-кB p65蛋白相对表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论 SYF对木瓜蛋白酶
诱导的兔KOA有保护作用，其作用机制与降低炎症因子IL-1β、TNF-α、PGE2水平及下调TLR4/MyD88/NF-кB信号通路相关。
关键词 十一方药酒；膝骨关节炎；炎症因子；TLR4/MyD88/NF-кB信号通路
Study on protective effects of Shiyifang medicinal wine on knee osteoarthritis in rabbits based on TLR4/
MyD88/NF-кB signaling pathway
ZHANG Wentao ，ZHOU Lingmei ，HUANG Honghai ，BAO Huihui ，MAO Dewen ，TIAN Hui ，LIU Shuling 1
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（1. Teaching Experiment Training Center，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200，China；
2. College of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200，China；3. Dept. of
Hepatology，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530023，China）
ABSTRACT OBJECTIVE To study the protective effect and mechanism of Shiyifang medicinal wine （SYF） on knee
osteoarthritis（KOA）of rabbit induced by papain. METHODS Thirty-five rabbits were randomly divided into blank group，model
group，positive group （Diclofenac diethylamine emulsion 200 mg/kg），SYF high-dose group （386 mg/kg） and SYF low-dose
group（97 mg/kg），with 7 rabbits in each group（all had 4 males and 3 females）. Except for the blank group，the other groups’
rabbits were injected 0.5 mL papain mixture（containing 2% papain and 0.03 mol/L L-cysteine）into the right knee cavity on day 1，
4 and 7，to replicate KOA model. Blank group was given constant volume of normal saline. From the 15th day，drugs were applied
to right hind knee joints of rabbits in each group，twice a day for 20 days. At the same time，the diameter of right knee joints of
rabbits was measured by vernier calipers at day 0，8，14 and 35 to calculate swelling degree. After the experiment，the levels of
IL-1β，TNF- α and PGE2 in synovial tissue were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Hematoxylin-eosin （HE）
staining was used to prepare the sections of synovial tissue，and the pathological changes were observed. The relative mRNA
expressions of TLR4，MyD88 and NF- кB p65 in the TLR4/MyD88/NF- кB signaling pathway were detected by real-time
quantitative polymerase chain reaction. The relative protein
Δ基金项目 广西创新驱动发展专项资金项目（No.桂科AA17202-
expressions of TLR4，MyD88，NF-кB p65 and p-NF-кB p65
036）；广西壮族自治区中医药管理局中药壮瑶药医院制剂质量提升项
were detect by Western blot. RESULTS Compared with blank
目（No.GZZJ202001）
＊第一作者 实验师，硕士。研究方向：中药药效学。E-mail： group， the degree of knee swelling could be increased in
215079602@qq.com model group，the pathological damage of synovial tissue was
# 通信作者 教授，博士。研究方向：中药品种鉴定与质量评价。 more serious，and the levels of IL-1β，TNF-α and PGE2 were
电话：0771-4953513。E-mail：377244732@ qq. com increased significantly in synovial tissue （P＜0.05）. The
·2224· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18 中国药房 2022年第33卷第18期
