Page 40 - 《中国药房》2022年15期

huagong decoction can improve the intestinal barrier by up-regulating the expression of Occludin and ZO-1 in small intestinal tissue
and down-regulating the protein expression of HMGB1. It can also adjust the relative abundances of different flora to protect the
intestinal tract.
KEYWORDS severe acute pancreatitis；Qingjie huagong decoction；intestinal flora；intestinal mucosal barrier

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是 1.2 主要药品与试剂
由胰蛋白酶异常激活、炎症因子大量释放入血而引发的 QJHGD药材饮片均购自广西仙茱中药科技有限公
胰腺水肿坏死及胰周组织液积聚。该病可并发肠梗阻、 司，分别为柴胡（批号17010267）、大黄（批号17010163）、
胃肠功能衰竭等疾病，严重者会出现全身炎症反应综合 厚朴（批号16060431）、黄芩（批号16060117）、木香（批号
征和多器官功能障碍等急危重症 。SAP在亚洲国家的 16080375）、桃 仁（ 批 号 16282049）、枳 实（ 批 号
[1]
发病率为 0.036％～0.125％，病死率为 6.5％～26％，且 16182144），经广西中医药大学中药真伪鉴定技术中心
进展迅速，预后凶险 [2－3] 。肠道是 SAP 早期受损的功能 鉴定为真品，符合《中国药典》相关规定 。将上述药材
[9]
器官之一，生理状态下，肠道菌群与肠黏膜屏障相互作 加 10 倍蒸馏水浸泡 24 h 后，武火煮沸，再以文火煮 30
用，共同维持肠道稳态并促进组织代谢、调节免疫等；疾 min，过滤；药渣继续加水煎煮 3 次，合并 3 次滤液，以旋
病状态下，肠道屏障功能障碍及肠道菌群失衡是SAP的 转蒸发仪浓缩，制成质量浓度为 1 g/mL 的药液（以生药
重要病理机制之一，菌群的结构、相对丰度、位置变化均 量计）。
可能破坏肠黏膜屏障的完整性，从而进一步诱发菌群移 其他药品与试剂有注射用乌司他丁（广东天普生
位，加重炎症水平，损害靶器官 [4－5] 。因此，在 SAP 早期 化医药股份有限公司，批号 032005103，规格 10×10 4
修复肠黏膜屏障功能，并及时抑制菌群移位，对降低全 U/支），雨蛙素、脂多糖（上海源叶生物科技有限公司，批
身炎症水平、遏制病情进展具有重要意义。清解化攻方 号分别为S62702、S11060），苏木素-伊红染色试剂盒、兔
（Qingjie huagong decoction，QJHGD）是广西中医药大学 闭合蛋白（Occludin）多克隆抗体（北京索莱宝科技有限
第一附属医院脾胃科治疗 SAP 的院内制剂，临床应用 公司，批号分别为G1120、K106466P），血清淀粉酶试剂盒
多年，已获国家发明专利（专利号 ZL201811021893.2）。 （北京冬歌博业生物科技有限公司，批号DG96286Q），白
本课题组前期研究表明，QJHGD 联合化学药治疗早期 细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA 试剂盒（上海
SAP 的临床疗效较好，可抑制炎症因子表达，降低胰腺 酶联生物科技有限公司，批号 ER008-96），IL-18 ELISA
组织坏死程度，保护肠黏膜屏障，但具体机制未完全 试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号
阐明 [6－8] 。 E-EL-R0567c），IL-10 ELISA试剂盒（深圳欣博盛生物科
本研究采用雨蛙素联合脂多糖腹腔注射法复制 技有限公司，批号 211070825），兔高迁移率族蛋白 B1
SAP 大鼠模型，采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked （HMGB1）多克隆抗体（武汉贝茵莱生物科技有限公司，
immunoadsordent assay，ELISA）法和Western blot法观察 批号PAB46173），兔闭锁连接蛋白1（ZO-1）多克隆抗体、
QJHGD对SAP模型大鼠炎症水平及肠黏膜屏障调节蛋 兔 GAPDH 多克隆抗体、HRP 标记的山羊抗兔免疫球蛋
白的影响；并基于16S rRNA高通量测序，初步探究该药 白 G 抗体、ECL 发光试剂盒（美国 Affinity 公司，批号分
对 SAP 模型大鼠肠黏膜屏障的保护作用及调节肠道菌 别为 AF5145、AF7021、S0001、KF003），RIPA 裂解液、
群、修复肠黏膜屏障的分子机制。 BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公
1 材料 司，批号分别为P0013B、P0010S）。
1.1 主要仪器 1.3 动物
本研究所用主要仪器有 Centrifuge5804R 型离心机 本研究所用动物为SPF级SD大鼠，8周龄，雄性，体
（德国Eppendorf公司），CKX41型倒置相差显微镜（日本 质量为（200±20）g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限
Olympus 公司），RM2016 型病理切片机（德国 Leica 公 公司，动物生产许可合格证号为 SCXK（湘）2019-0004。
司），Thermo HistoStar 型组织包埋机（江苏维林科生物 大鼠饲养于广西中医药大学第一附属医院医学分子生
技术有限公司），Qubit 3.0 Fluromete型荧光定量仪、Mul- 物学实验中心 SPF 级实验室，动物使用许可证号为
tiskan GO 型全波长酶标仪（美国 Thermo Fisher Scienti- SYXK（桂）2019-0001。实验室环境湿度为55％～65％，
fic公司），Amersham Imager 600型超灵敏多功能成像仪 温度为（24±2）℃，光暗循环12 h/12 h，实验前适应性喂
（美国GE公司），Agilent 2100 Bioanalyzer型生物芯片分 养1周，期间自由饮水和进食。本研究符合动物实验伦
析系统（美国Agilent公司）。 理要求。

·1826 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 15 中国药房 2022年第33卷第15期