Page 38 - 《中国药房》2022年15期
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表3    各组细胞中RORγt基因启动子甲基化水平及其转                       现，Th17细胞中RORC2基因启动子呈低甲基化水平，而
              录活性测定结果（x±±s，n＝3）                             初始 T 细胞和 Th1 细胞中 RORC2 基因启动子呈高甲基
         组别                  甲基化水平             转录活性         化水平，这提示 RORC2 基因甲基化水平的降低可能是
         空白血清对照组            1.000±0.050       7.323±0.505   初始 T 细胞和 Th1 细胞向 Th17 细胞转化的必要条件。
         含药血清低剂量组           1.017±0.032       6.565±0.398 a  由此可见，从调节RORγt基因甲基化的表观遗传学角度
         含药血清中剂量组           1.133±0.031 a     5.600±0.450 a
         含药血清高剂量组           1.223±0.025 a     5.170±0.332 a  出发来调控 Th17 细胞数量，可作为硬皮病防治的新思
         DAC组               1.467±0.061 a     4.140±0.512 a  路。本研究发现，温阳化浊通络方含药血清可以升高
            a：与空白血清对照组比较，P＜0.05                             Th17 细胞中 RORγt 基因启动子甲基化水平，并可抑制
        4 讨论                                                RORγt基因启动子转录活性，说明温阳化浊通络方含药
            在血清药理学实验中，研究者通常会选择雄性大鼠                          血清可通过调节RORγt基因甲基化影响Th17细胞数量。
        或雌雄各半的大鼠来制备含药血清，但也有部分研究仅                                综上，温阳化浊通络方含药血清可通过促进 RORγt
                                          [10]
        选用雌性大鼠来进行含药血清的制备 。因硬皮病的                             基因启动子甲基化及下调 RORγt 基因转录活性，抑制
                                                     [11]
        发病对象以女性为主（男女发病率之比为1 ∶ 3～1 ∶ 8） ，                    RORγt 表达及 IL-17 分泌，从而抑制 Th17 细胞的增殖。
        为了避免雄性大鼠血清中某些成分对细胞的影响，也为                            但是本研究也可能存在如下问题：（1）虽然通过制备含
        了与临床研究对象保持一致 ，故本研究仅选用了雌性                            药血清可以更好地模拟中药的有效成分，更准确、科学
                                 [12]
        大鼠作为研究对象。DAC 为 DNA 甲基化酶抑制剂，其                        地进行中药复方体外药效学和药理学评价 ，但是在血
                                                                                                 [20]
        可通过抑制 DNA 甲基化酶的表达起到抑制 DNA 甲基                        清中检测到的成分是否为有效成分很难确定，而且血清
                [13]
        化的作用 ，因此本研究选择DAC作为阳性对照药。                            中化学成分含量复杂，给鉴定带来了巨大的困难 。（2）
                                                                                                      [21]
                                               +
            Th17 细胞是以分泌 IL-17A 为主的 CD4 T 细胞亚                温阳化浊通络方含药血清对Th17细胞的作用具有非特
        群，Th17 细胞的异常增殖会促进 IL-17 等促炎因子的产                     异性，而 Th17 细胞的增殖及 RORγt 的表达受到多种方
                                [14]
        生，引起组织损伤及纤维化 。转录因子RORγt是调节                          式的调节，后续还需深入研究温阳化浊通络方含药血清
        Th17细胞分化和发育的关键因子，其可与靶基因启动子                          是否通过其他途径调节正常人及硬皮病患者Th17细胞
        结合，调节IL-17等炎症因子的表达，在自身免疫性疾病                         增殖。
        中发挥重要作用 。万琳琳等 研究发现，硬皮病患者                            参考文献
                                   [16]
                       [15]
        外周血中 Thl7 细胞数量以及 IL-17、RORγt 表达水平明
                                                            [ 1 ]  MO C L，ZENG Z T，DENG Q C，et al. Imbalance between
        显高于非活动期硬皮病患者和正常人，并与活动期硬皮                                 T helper 17 and regulatory T cell subsets plays a significant
                                             [17]
        病患者病情活动度呈正相关。Okamoto 等 研究发现，                             role in the pathogenesis of systemic sclerosis[J]. Biomed
        与正常小鼠相比，博来霉素诱导的硬皮病模型小鼠的皮                                 Pharmacother，2018，108：177-183.
        肤和肺组织中Th17细胞浸润明显，血清、皮肤和肺组织                          [ 2 ]  MAZZONI A，SANTARLASCI V，MAGGI L，et al. De-
                                                                                                          +
        中IL-17A和RORγt表达水平显著升高。上述研究表明，                            methylation of the RORC2 and IL17A in human CD4 T
        Th17 细胞异常增殖及 IL-17、RORγt 在硬皮病患者体内                        lymphocytes defines Th17 origin of nonclassic Th1 cells
        表达上调在疾病进程中起着重要作用。由此可见，通过                                 [J]. J Immunol，2015，194（7）：3116-3126.
        RORγt 调节 Th17 细胞平衡可能是治疗硬皮病的潜在                       [ 3 ]  ALMANZAR G，KLEIN M，SCHMALZING M，et al.
        靶点。                                                      Disease manifestation and inflammatory activity as modu-
            本研究发现，温阳化浊通络方含药血清可抑制硬皮                               lators of Th17/Treg balance and RORC/FoxP3 methyla-
                                                                 tion in systemic sclerosis[J]. Int Arch Allergy Immunol，
        病患者外周血来源 Th17 细胞的增殖以及 IL-17、RORγt
                                                                 2016，171（2）：141-154.
        mRNA及其蛋白的表达。梁娟等 发现，红花水煎液可
                                     [18]
                                                            [ 4 ]  卞华，王帅，张翠月，等.从肺脾肾-皮毛相关论治系统性
        通过降低硬皮病模型小鼠皮肤组织中 RORγt 蛋白的表
                                                                 硬化病的理论基础[J].中华中医药杂志，2017，32（2）：
        达，抑制免疫炎症反应来发挥其抗皮肤纤维化的作用。
                                                                 701-703.
        其结果也表明，中医药可通过干预Th17细胞增殖、调节
                                                            [ 5 ]  王倩，吕芹，卞华.温阳化浊通络方治疗系统性硬化病的
        免疫反应来发挥治疗硬皮病的作用。但本课题组前期                                  研究进展[J].南阳理工学院学报，2021，13（4）：118-122.
        研究发现，温阳化浊通络方含药血清对正常人 Th17 细                         [ 6 ]  卞华，袁敏，郜中明，等.温阳化浊通络方对系统性硬化病
        胞中RORγt mRNA及蛋白表达也有一定的抑制作用，说                             患者外周血 Th17/Treg 细胞平衡的影响[J].中国中西医
        明温阳化浊通络方含药血清对硬皮病患者Th17细胞的                                结合杂志，2015，35（8）：975-980.
        作用可能是非特异性的。                                         [ 7 ]  吕芹，韩立，丁生晨，等.温阳化浊通络方对系统性硬化病
            DNA甲基化是表观遗传学修饰之一，在基因表达调                              患者 Th17 细胞增殖的影响[J]. 中成药，2020，42（12）：
        控中起着重要作用，基因 DNA 高度甲基化会导致基因                               3293-3297.
        低表达，而低甲基化则使基因高表达 。Mazzoni等 发                                                          （下转第1832页）
                                                     [2]
                                        [19]
        ·1824 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 15                                 中国药房    2022年第33卷第15期
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