Page 75 - 《中国药房》2022年11期
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三子散系蒙古族经典名方，收载于 2020 年版《中国                     110753-202018，纯度≥96.1％）9种对照品均购自中国食
        药典》（一部），由诃子、川楝子、栀子3味药材按1 ∶ 1 ∶ 1配                  品药品检定研究院；柯里拉京（批号 DST190113-012，纯
              [1]
        比组成 。该方具有清血热、解毒等功效，将其制成糊状                          度≥98.2％）、木犀草素（批号 DSTDM003201，纯度≥
        外用还具有收敛、止痛、消炎的作用，蒙医临床用于温                           98.0％）、齐墩果酸（批号 DSTDQ005101，纯度≥98.0％）
                                       [2]
        热、血热、眩晕、新久热等疾病的治疗 。现有研究表明，                         3种对照品均购自成都德思特生物科技有限公司；甲醇、
        三子散所含化学成分主要包括环烯醚萜苷类、鞣质类、                           乙腈均为色谱纯，甲酸、乙酸铵均为分析纯，水为超
                         [3]
        黄酮类、有机酸类等 ，但其在疾病治疗过程中发挥药效                          纯水。
        的活性成分尚不清楚。而明确该方的化学物质组成是                            2 方法
        阐明其药效物质基础的重要前提。本课题组前期采用                            2.1 色谱-质谱条件
        高效液相色谱串联三重四极杆质谱技术，以方中没食子                               采用 Shim-pack GIST-HP C18 色谱柱（150 mm×4.6
        酸、阿魏酸、栀子苷、槲皮素、川楝素等10种成分含量为                         mm，3 μm），以乙腈（A）-0.1％甲酸溶液（B）为流动相进
                                                     [4]
        指标，通过正交实验对三子散的醇提工艺进行了优化 ，                          行梯度洗脱（0～10 min，10％A；10～15 min，10％A→
        并在最优提取工艺的支撑下，通过冷冻干燥技术获得了                           30％A；15～25 min，30％A→70％A；25～30 min，70％A→
        三子散醇提物。在此基础上，本研究采用具有分析周期                           90％A；30～35 min，90％A；35～40 min，10％A）；流速为
        短、检测灵敏度高等特点的高效液相色谱-四极杆/静电                          1 mL/min；柱温为40 ℃；进样量为10 μL。
        场轨道阱高分辨质谱（HPLC-Q-Exactive-MS）技术对三                      采用电喷雾离子源（ESI），在正、负离子检测模式下
        子散醇提物中的复杂化学成分进行快速在线分离与鉴                            检测。正离子检测模式下的检测条件为：辅助气体积流
        定，从而为后续该方移行入血成分分析、药动学-药效学                          量30 L/min，喷雾电压3.50 kV，离子传输管温度300 ℃，
        相关性研究等提供基础，进而阐明该方的药效物质                             辅助气温度200 ℃，碰撞能量45 eV；负离子检测模式下
        基础。                                                的检测条件为：辅助气体积流量 30 L/min，喷雾电压
        1 材料                                               2.80 kV，离子传输管温度400 ℃，辅助气温度100 ℃，碰
                                                                                                2
        1.1  主要仪器                                          撞能量 30 eV。检测方式为 Full MS/dd-MS ，Full MS 分
                                                                              2
            HPLC-Q-Exactive 型高效液相色谱-质谱联用系统                 辨率为 70 000，dd-MS 分辨率为 17 500，扫描范围为 m/z
       （含 Ultimate 3000 型色谱仪、Q-Exactive 型高分辨质谱             110～1 200。
        仪）购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；AP135W 型                       2.2  溶液的制备
                                                                                                     [4]
        十万分之一电子天平购自日本Shimadzu公司；KH-500DV                   2.2.1  供试品溶液的制备          根据前期实验基础 ，按处
        型数控超声波清洗器购自昆山禾创超声有限公司；                             方比例称取川楝子、栀子、诃子饮片，粉碎，混匀，过60目
        2TB-A 型磁力加热搅拌电热套购自山东鄄城华鲁电热                         筛。称取混合粉末共约 180.00 g，置于圆底烧瓶中，加
        仪器有限公司；RE3000A型全自动旋转蒸发仪购自郑州                        50％乙醇 1 800 mL，用电热套加热回流提取 3 次、每次
        科达机械仪器设备有限公司；FDU2110型冷冻干燥机购                        1.5 h，分别过滤并收集滤液。合并3次滤液，旋蒸浓缩，
        自东京理化器械株式会社。                                       回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得到三子散醇提物冻干
        1.2  主要药品与试剂                                       粉。称取上述冻干粉1.0 g于10 mL量瓶中，加甲醇至刻
            栀子（批号 19072703，产地为江西）、川楝子（批号                   度后称质量，超声（功率 200 W，频率 50 kHz）20 min，冷
        200101131，产地为四川）、诃子（批号 20022403，产地为                却至室温，再次称定其质量，以甲醇补足减少的质量，经
        云南）饮片均购自内蒙古北域药业有限责任公司，经内                           0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。
        蒙古医科大学药学院中药资源教研室渠弼教授鉴定分                            2.2.2  对照品溶液的制备          精密称取川楝素、栀子苷、
        别为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis、楝科植            齐墩果酸、山柰酚、没食子酸、鞣花酸、柯里拉京、槲皮
        物川楝 Melia toosendan Sieb. et Zucc.和绒毛诃子 Termi-     素、阿魏酸、芦丁、木犀草素、绿原酸12种对照品各适量，
        nalia chebula Retz. var tomentella Kurt. 的 干 燥 成 熟 果  分别置于不同 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解定容，制成上
        实。川楝素（批号 111824-201804，纯度≥96.9％）、栀子                述 12 种成分质量浓度分别为 475、201、258、285、206、
        苷（批号 110749-201718，纯度≥97.6％）、山柰酚（批号                200、239、237、255、228、292、344 μg/mL的单一对照品贮
        110861-202013，纯度≥98.0％）、没食子酸（批号110831-             备液。分别精密量取上述各单一对照品贮备液适量，置
        201605，纯度≥98.8％）、鞣花酸（批号111959-201903，纯             于同一 10 mL 量瓶中，加甲醇定容，制成上述 12 种成分
        度 ≥88.8％）、槲 皮 素（批 号 100081-201810，纯 度 ≥            质量浓度分别为 950、402、516、570、412、400、478、474、
        99.1％）、阿魏酸（批号 110773-201914，纯度≥99.0％）、             510、456、584、688 ng/mL 的混合对照品溶液，将其置于
        芦 丁（批 号 21020402，纯 度 ≥98.0％）、绿 原 酸（批 号             4 ℃保存，备用。


        中国药房    2022年第33卷第11期                                             China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11  ·1349 ·
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