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2.5.2  重复性试验      取同一批当归补血丸（S15）细粉适                表1 15批当归补血丸指纹图谱与对照指纹图谱R的相
        量，共称取6份，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶                             似度评价结果
        液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结                         样品编号            相似度     样品编号           相似度
                                                            S1              0.894   S9              0.981
        果，以32号峰为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间
                                                            S2              0.946   S10             0.995
        的RSD为0.08％～0.09％（n＝6）、相对峰面积的RSD为                    S3              0.946   S11             0.990
        1.05％～2.54％（n＝6），表明此方法重复性良好。                        S4              0.993   S12             0.988
                                                            S5              0.976   S13             0.893
        2.5.3  稳定性试验      取当归补血丸（S15）细粉适量，按
                                                            S6              0.984   S14             0.982
       “2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在室温下放置 0、                         S7              0.912   S15             0.973
        2、4、8、12、24 h时，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录                  S8              0.995
        色谱图。结果，以32号峰为参照峰，计算得各共有峰相                          2.6 指标成分含量测定
        对保留时间的 RSD 为 0.02％～0.07％（n＝6）、相对峰面                 2.6.1  专属性试验      分别取“2.2”项下混合对照品溶液、
        积的 RSD 为 0.49％～2.57％（n＝6），表明该供试品溶液                “2.3”项下供试品溶液（S15）及空白溶剂（80％甲醇），按
        在室温下24 h内的稳定性良好。                                  “2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图（见图3）。结
        2.5.4  指纹图谱生成及相似度评价              取 15 批当归补血        果显示，阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷的保留
        丸样品细粉，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再                        时间分别为25.948、27.465、54.664 min，与相邻色谱峰的
        按“2.1”项下色谱条件（其中检测波长为323 nm）进样分                     分离度均大于 2.0，理论板数均大于 80 000，且空白溶剂
        析，记录色谱图。将 15 批样品的 HPLC 图谱导入《中药                     对测定无干扰，表明该方法的专属性良好。
        色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》中，选择样品                       2.6.2  线性关系及检测限、定量限考察              分别取“2.2”项
        S1 的图谱作为参照图谱，经多点校正后，进行全谱峰匹                         下混合对照品溶液 0.8、1.0、1.5、2.5、5 mL 于 5 mL 量瓶
        配生成叠加指纹图谱，并以中位数法生成对照指纹图谱                           中，用80％甲醇稀释至刻度，然后按“2.1”项下色谱条件
        R（见图1）。以对照指纹图谱R为参照，对各样品的色谱                         进样测定，记录峰面积。以样品进样量（x）为横坐标，阿
                                                           魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷以峰面积（y）为纵坐标、黄
        图进行相似度评价。结果，在15批样品的叠加指纹图谱
                                                           芪甲苷以峰面积对数值（lgy）为纵坐标绘制标准曲线，并
        中共发现33个共有峰。与生成的对照图谱R比较，15批
                                                           进行线性回归。结果，3种指标成分在各自进样量范围内
        样品色图谱的相似度在 0.893～0.995 之间（见表 1），表
                                                           线性关系均良好（r 为 0.999 0～0.999 5）。取“2.2”项下
        明15批样品的化学成分组成基本相同。
                                                           混合对照品适量，以 80％甲醇为溶剂进行逐级稀释，以
                                                           信噪比10∶1、3∶1分别得定量限和检测限。结果见表2。
          1 100
                                                           2.6.3  精密度试验       取“2.2”项下混合对照品溶液，按
           800                                            “2.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰面积。结果，
                                                       R
                                                       S15 S14  阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷峰面积的 RSD
         mAU  600                                      S13 S12
                                                       S11  分别为 2.02％、2.15％、1.09％（n＝6），表明仪器的精密
                                                       S10
           400                                         S9  度良好。
                                                       S8
                                                       S7
                                                       S6  2.6.4  稳定性试验       取“2.3”项下供试品溶液（S15），于
           200                                         S5
                                                       S4  室温下分别放置 0、2、4、8、12、24 h 时，按“2.1”项下色谱
                                                       S3
                                                       S2
            0                                          S1  条件进样测定，记录峰面积。结果，阿魏酸、毛蕊异黄酮
              0     10    20    30    40    50    60
                               t/min                       葡 萄 糖 苷 、黄 芪 甲 苷 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 2.37％ 、
                                                           0.60％、0.49％（n＝6），表明供试品溶液在室温下24 h内
          图1 15批样品的叠加指纹图谱和对照指纹图谱R
                                                           稳定性良好。
        2.5.5  共有峰的指认和归属          取当归对照药材溶液、黄              2.6.5  重复性试验       取同一批样品（S15）6 份，每份约
        芪对照药材溶液、“2.2”项下混合对照品溶液和“2.3”项                      2.00 g，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，然后按
        下供试品溶液（S1），分别按“2.1”项下色谱条件进样测                      “2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并采用外标
        定，记录色谱图（见图 2）。通过与混合对照品溶液色谱                         法计算含量。结果，阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪
        图进行比对，可指认出13号峰为阿魏酸、15号峰为毛蕊                         甲苷的含量分别为 0.093 6、0.361 9、0.915 9 mg/g，RSD
        异黄酮葡萄糖苷；通过与对照药材色谱图进行比对，可                           分别为 1.62％、2.99％、1.56％（n＝6），表明该方法的重
        发现1～3、7、8、10、12、13（阿魏酸）、17～19、27～29、32、            复性良好。
        33号峰归属于当归，14、15（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、20～                     2.6.6  加样回收率试验          精密称取已知含量的样品
        23、25号峰归属于黄芪。                                      （S15）6份，每份约1.00 g，分别按已知成分含量1 ∶ 1的比


        中国药房    2022年第33卷第11期                                             China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11  ·1345 ·
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