Page 73 - 《中国药房》2022年9期

表2 各组细胞中AST、ALT 水平测定结果（x±±s，n＝3， 3.5 细胞线粒体膜电位测定结果
U/L） 与空白对照组比较，补骨脂模型组细胞中绿色荧光
组别 AST ALT 强于红色荧光，线粒体膜电位降低（P＜0.01）；与补骨脂
空白对照组 28.45±3.41 22.21±3.02 模型组比较，补骨脂-五味子低、中、高剂量组细胞中红
补骨脂模型组 204.36±5.99 a 152.59±8.61 a 色荧光强于绿色荧光，线粒体膜电位显著升高（P＜
补骨脂-五味子低剂量组 175.96±4.08 b 138.71±6.70 c
补骨脂-五味子中剂量组 128.33±4.94 b 99.00±3.98 c 0.01）。结果见表4、图2。
补骨脂-五味子高剂量组 82.70±5.61 b 62.37±4.48 b 表 4 各组细胞 ROS 水平和线粒体膜电位测定结果
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与补骨脂模型组比较，P＜0.01； （x±±s，n＝3）
c：与补骨脂模型组比较，P＜0.05
组别 ROS/％ 线粒体膜电位（红/绿荧光强度比值）
表3 各组细胞培养液中GSH、SOD、MDA水平测定结 空白对照组 1.11±0.04 1.01±0.01
补骨脂模型组 22.47±3.14 a 0.31±0.01 a
果（x±±s，n＝3）
补骨脂-五味子低剂量组 14.53±1.05 b 0.39±0.01 b
组别 GSH/（μg/L） SOD/（U/mL） MDA/（nmol/mL） 补骨脂-五味子中剂量组 8.76±2.11 b 0.52±0.02 b
空白对照组 116.15±1.61 17.82±0.21 3.98±0.41 补骨脂-五味子高剂量组 7.64±2.62 b 0.74±0.01 b
补骨脂模型组 88.01±3.95 a 8.04±0.24 b 8.01±0.25 a
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与补骨脂模型组比较，P＜0.01
补骨脂-五味子低剂量组 102.68±2.90 c 8.51±0.45 c 7.53±0.21 c
补骨脂-五味子中剂量组 105.92±3.08 c 11.39±0.30 d 6.56±0.21 d 3.6 细胞中GRP-78、PERK mRNA表达水平测定结果
补骨脂-五味子高剂量组 115.28±3.22 d 13.16±0.27 d 5.60±0.32 d 与空白对照组比较，补骨脂模型组细胞中 GRP-78、
a：与空白对照组比较，P＜0.05；b：与空白对照组比较，P＜0.01； PERK mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）；
c：与补骨脂模型组比较，P＜0.05；d：与补骨脂模型组比较，P＜0.01 与补骨脂模型组比较，补骨脂-五味子低、中、高剂量组
3.4 细胞中ROS水平测定结果
细胞中的 GRP-78、PERK mRNA 表达水平均显著降低
与空白对照组比较，补骨脂模型组细胞中ROS水平
（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表5。
显著升高（P＜0.01）；与补骨脂模型组比较，补骨脂-五味
3.7 细胞中GRP-78、PERK蛋白表达水平测定结果
子低、中、高剂量组细胞中 ROS 水平均显著降低（P＜
与空白对照组比较，补骨脂模型组细胞中GRP-78、
0.01）。结果见图1、表4。
PERK蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）；与补骨脂模型
500
FITC-A- FITC-A+ FITC-A- FITC-A+ 组比较，补骨脂-五味子低、中、高剂量组细胞中GRP-78、
600 99.9 0.065 77.0 23.0
400
PERK 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。
400 300 结果见图3、表6。
Count Count 200 4 讨论
200
100 在我国，由中药引发的药物性肝损伤（drug-induced
[13]
liver injury，DILI）病例约占总 DILI 病例的 26％ ，其中
0 0
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 由补骨脂造成的肝损伤因发病率较高越来越受到关
FITC-A FITC-A
A.空白对照组 B.补骨脂模型组 注。但目前关于补骨脂致肝损伤的作用机制仍未完全
600
FITC-A- FITC-A+ FITC-A- FITC-A+ 阐明。一般认为肝损伤与引起机体胆汁淤积及干扰肝
500 86.5 13.5 93.1 6.89
再生、氧化应激与线粒体功能、内质网应激反应等相
400 400 关 。其中氧化应激和内质网应激引起的肝细胞损伤
[14]
Count 300 Count 200 在各种肝脏疾病的发病机制中起着重要作用 [15－19] 。
200
氧化应激是肝损伤的危险因素之一。在氧化应激
100
过程中，长期保持高水平的ROS会引起 DNA、蛋白质和
0 0
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 脂质受损；当 ROS 水平超过机体的抗氧化能力后，会导
FITC-A FITC-A
C.补骨脂-五味子低剂量组 D.补骨脂-五味子中剂量组 致细胞内的抗氧化物质 GSH 和 SOD 过量消耗，使细胞
FITC-A- FITC-A+ 内脂质过氧化、MDA 水平升高，加剧线粒体功能障碍，
600 94.9 5.07
致使 AST、ALT 过度释放，引起细胞损伤 。线粒体损
[20]
[21]
400 伤的早期标志是线粒体膜电位降低 。线粒体损伤后
Count 可导致大量的 ROS 产生，进而打破机体的氧化平衡状
200 [22]
态，最终致使线粒体膜电位发生变化 。因此，AST、
ALT、GSH、SOD、MDA、ROS 水平和线粒体膜电位是反
0
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 映细胞氧化应激程度的重要指标。近年来越来越多的
FITC-A
E.补骨脂-五味子高剂量组 研究发现，内质网应激与DILI有关 [23－24] 。当折叠错误蛋
图1 各组细胞中ROS水平检测的流式细胞图 白或未折叠蛋白在内质网内大量积累以及钙在内质网

中国药房 2022年第33卷第9期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 9 ·1091 ·