Page 68 - 《中国药房》2022年9期

最早发生的事件，一旦线粒体膜电位崩溃，则细胞凋亡
Bax 21 kDa
不可逆转 。本研究中荧光倒置显微镜观察结果显示，
[8]
GLA 5、10 μg/mL 作用于 HCCLM3 细胞 24 h，均可诱导
Bcl-2 26 kDa
线粒体膜电位下降，其中 GLA 10 μg/mL 诱导作用更为
明显。流式细胞术检测结果也证实，GLA 10 μg/mL 作
cleaved caspase-3 17 kDa
用于HCCLM3细胞24 h，其促凋亡作用更为明显。这提
Beclin1 52 kDa 示GLA促进细胞凋亡与其诱导线粒体膜电位下降相关，
[9]
GLA能够通过线粒体途径促进细胞凋亡 。
β-actin 43 kDa Bax与Bcl-2是线粒体凋亡途径的重要因子，也是内
对照组 GLA 2.5 GLA 5 GLA 10 源性凋亡的主要调控者。研究显示，细胞受到信号分子
μg/mL组 μg/mL组 μg/mL组
刺激后，Bax形成寡聚体，从细胞质转移到线粒体膜上，
A.蛋白表达电泳图
与 Bcl-2 形成多聚体，通过在线粒体外膜上形成孔洞来
对照组
增强线粒体膜的通透性，诱导细胞色素C释放，诱发cas-
GLA 2.5 μg/mL组
1.8 pase蛋白酶家族的酶联激活，促进细胞凋亡 。Bcl-2的
[10]
GLA 5 μg/mL组 a
16
GLA 10 μg/mL组 过表达与较多肿瘤的发生密切相关，以 Bcl-2 为靶点的
1.4 a
药物研究一直是抗肿瘤药物研究的热点 [11－13] 。
1.2
a
蛋白表达水平 0.8 1 a 受关注。GLA是从香茶菜中分离提取的活性成分，民间
a
香茶菜属于传统中草药，因其活性强、毒性小而备
a
0.6
a 用于抗炎、抗肿瘤治疗历史悠久 [1－3] 。基础研究显示，在
0.4 肝癌、膀胱癌、骨肉瘤等裸鼠模型中，GLA能够显著抑制
a
0.2
肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡，且对主要脏器无明
0
Bax Bcl-2 cleaved caspase-3 Beclin1 显的毒副作用 [2－4，9] 。本研究中流式细胞术检测结果显
B.蛋白表达水平柱状图 示，GLA 10 μg/mL能够显著促进细胞凋亡；Western blot
a：与对照组比较，P＜0.01 检测结果进一步证实，GLA 10 μg/mL 能够显著促进
图 5 各组 HCCLM3 细胞中 Bax、Bcl-2、cleaved cas-
Bax、cleaved caspase-3、Beclin1 蛋 白 表 达 ，显 著 抑 制
pase-3、Beclin1的蛋白表达结果
Bcl-2 蛋白表达。这提示 GLA 可通过线粒体通路促进
HCCLM3细胞凋亡，且存在剂量效应趋势。
Beclin1 52 kDa Beclin1 52 kDa
细胞自噬作为细胞程序性死亡的另一种方式，与细
Bcl-2 26 kDa Bcl-2 26 kDa 胞凋亡密切相关。线粒体也是参与细胞自噬的重要细
IgG Bcl-2 Input IgG Bcl-2 Input
胞器。Beclin1介导的自噬信号通路与Bax/Bcl-2线粒体
A. GLA 5 μg/mL组 B. GLA 10 μg/mL组
凋亡通路之间存在交叉 [14－15] 。Beclin1 通过 BH3 结构域
图 6 GLA 对 HCCLM3 细胞中 Bcl-2 与 Beclin1 结合影
与 Bcl-2 结合，竞争性地抑制 Bax 与 Bcl-2 的结合，导致
响的蛋白表达电泳图
Bax/Bcl-2 比值升高，促进细胞凋亡；相反，Beclin1 也可
4 讨论 与Bcl-2解离，不影响Bax与Bcl-2的结合，同时释放游离
细胞周期是细胞从一次分裂完成开始到下一次分 Beclin1，促进细胞自噬 。研究显示，Beclin1 过表达可
[14]
裂结束所经历的全过程，分为间期（G1、S、G2期）与分裂 以降低线粒体膜电位，并通过与 Bcl-2 结合增加顺铂诱
[15]
期（M 期）：G2期是 DNA 复制结束与有丝分裂开始之间 导的细胞凋亡 ；孕酮受体拮抗剂能够减弱 Bcl-2 与
的间隙，为进入 M 期提供物质条件；G2～M 期是细胞处 Beclin1结合，通过Bcl-2/Beclin1轴调节子宫肌瘤细胞自
于复杂活跃的分子水平变化时期，容易受外界条件的影 噬与凋亡 ；氧化鱼油也能够抑制 Bcl-2 与 Beclin1 结合
[16]
响；而G0期是具有分裂能力但暂时未进入细胞周期的细 从而促进细胞自噬，并导致线粒体功能障碍 。Beclin1
[17]
胞。如果能够人为调控细胞周期，对深入认识肿瘤的 与 Bcl-2 的结合在调节细胞自噬与凋亡转归中意义重
发生及研究抗肿瘤药物的作用机制具有重要意义。研 大。本研究通过免疫共沉淀法检测，结果显示 Bcl-2 与
[4]
究发现，GLA 能够诱发膀胱癌细胞周期阻滞 。本研究 Beclin1 在 HCCLM3 细胞中相互作用，且 GLA 10 μg/mL
结果进一步证实，GLA 5、10 μg/mL 能够诱发人肝癌 作用于HCCLM3细胞 24 h，能够促进Bcl-2与Beclin1结
HCCLM3细胞明显阻滞于G2～M期。 合。再根据 Western blot 法检测结果，笔者推测 GLA 10
细胞周期阻滞后通常会诱导线粒体膜电位改变，线 μg/mL 在 促 进 Bcl-2 与 Beclin1 结 合 的 同 时 ，也 促 进
粒体跨膜电位下降被认为是细胞凋亡级联反应过程中 HCCLM3 细胞表达 Bax 蛋白，使细胞中 Bax/Bcl-2 比值

·1086 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 9 中国药房 2022年第33卷第9期