Page 91 - 《中国药房》2022年6期
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提取进行了相关研究，但仅限于单一成分，且存在设备                           含量（g/g）＝DF质量/苦杏仁皮粉末质量。
        要求高、经济效益低、二次环境污染等问题                  [10－13] 。生物   2.3 黄酮的含量测定
        酶辅助提取可根据植物药材细胞壁的结构特点，利用酶                               采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法显色，以紫
        反应使细胞壁组分水解或降解，具有高度专一、反应条                           外分光光度计进行检测 。
                                                                               [18]
        件温和、操作简便、提取率高、环境污染少等优点                     [14－15] 。  2.3.1  对照品贮备液的制备        取芦丁对照品适量，精密
        同步提取可综合利用苦杏仁皮的有效成分，具有一提多                           称定，加 50％乙醇溶解，混匀，制得质量浓度为 204.4
        效的效果，可提高苦杏仁皮的利用率。基于此，本研究                           µg/mL的对照品贮备液。
        以生物酶辅助同步提取法提取苦杏仁皮中的 DF 和黄                          2.3.2  供试品溶液的制备           取苦杏仁皮粉末 10 g，按
                                   [16]
        酮，采用酶-重量法测定DF含量 ，采用紫外分光光度法                        “2.1”项下方法制得萃取液，蒸干，残渣加50％乙醇溶解
        检测黄酮含量（以芦丁计）；同时以料液比、pH、木瓜蛋白                        并定容至10 mL，混匀，即得供试品溶液。
        酶溶液浓度、α-淀粉酶溶液浓度、酶解温度和酶解时间                          2.3.3  线性关系考察 精密移取质量浓度为162.2 µg/mL
        为考察因素，DF和黄酮含量为指标，采用正交实验设计                          的芦丁对照品溶液（按“2.3.1”项下方法制得）1.0、2.0、
        对其提取工艺进行优化，旨在为苦杏仁皮的高值化利用                           2.5、3.0、4.0、4.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加5％亚硝
        提供参考。                                              酸钠溶液 0.4 mL，摇匀，静置 6 min 后，加 10％硝酸铝溶
        1 材料                                               液 0.4 mL，摇匀，静置 6 min 后，加 4％氢氧化钠溶液 4
        1.1 主要仪器                                           mL，再加50％乙醇定容，摇匀，静置15 min，用50％乙醇
            本研究所用主要仪器有T2602S型双光束紫外分光                       定容，混匀，制成质量浓度为 16.22、32.44、40.55、48.66、
        光度计（上海佑科仪器仪表有限公司）、T1000 型电子天                       64.88、72.99 µg/mL 的系列线性工作溶液。以 50％乙醇
        平（常熟市双杰测试仪器厂）、AUY120型电子分析天平                        为空白对照，采用紫外分光光度计于510 nm波长处测定
                                                                 [18]
       （广州湘仪机电设备有限公司）、KQ-500DE 型数控超声                       吸光度 。以芦丁质量浓度（X）为横坐标、吸光度（Y）为
        波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）等。                                纵坐标进行线性回归，得回归方程为 Y＝11.481 0X+
        1.2  主要药品与试剂                                       0.043 5（r＝0.999 5），表明芦丁检测质量浓度在 16.22～
            芦丁对照品（批号 T27F10Z81699，纯度≥98％）购                 72.99 µg/mL范围内与吸光度成良好的线性关系。
        自 上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ；α- 淀 粉 酶（批 号            2.3.4  精密度试验       精密移取“2.3.1”项下对照品贮备
        C11581550，规格4 000 U/g）购自上海麦克林生化科技有                 液，用50％乙醇稀释至质量浓度为20.44 µg/mL，取适量
        限公司；木瓜蛋白酶（批号170108，规格≥1 000 000 U/g）               按“2.3.3”项下方法显色后（自“加 5％亚硝酸钠溶液 0.4
        购自上海蓝季科技发展有限公司；无水乙醇、乙酸乙酯、                          mL”开始操作，下同），以 50％乙醇为空白对照，采用紫
        氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、冰醋酸均为分析纯，水为                          外分光光度计于 510 nm 波长处连续测定 5 次吸光度。
        蒸馏水。                                               结果显示，吸光度的 RSD 为 0.09％（n＝5），表明仪器精
            苦杏仁皮（批号YY-190501）由岭南中药饮片有限公                    密度良好。
        司提供，经广州中医药大学中药学院吴文如副教授鉴定                           2.3.5  重复性试验       取苦杏仁皮粉末约 10 g，精密称
        为蔷薇科植物杏P. armeniaca L.的干燥成熟种皮。苦杏                   定，共 5 份，分别按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，再
        仁皮经干燥、粉碎，过40目筛，密封保存，备用。                            按“2.3.3”项下方法显色后，以 50％乙醇为空白对照，采
        2 方法与结果                                            用紫外分光光度计于510 nm波长处测定吸光度并按标
        2.1  苦杏仁皮中DF和黄酮的同步提取                               准曲线法计算样品中黄酮的质量浓度，然后按下式计算
            取苦杏仁皮粉末约 10 g，精密称定，置于圆底烧瓶                      含量：黄酮含量（mg/g）＝c×V×n/m。式中，c为样品中黄
        中，按料液比 1 ∶ 10（g/mL，下同）加水适量，超声（功率                   酮的质量浓度；V为最初定容的体积；n为稀释倍数；m为
                                                                              [19]
        500 W，频率 70 kHz）处理 5 min，在 pH5（以 10％乙酸溶            苦杏仁皮粉末的质量 。结果显示，黄酮含量的RSD为
        液和 4％氢氧化钠溶液调节 pH 值）条件下加入 0.5％的                     3.80％（n＝5），表明方法重复性良好。
        木瓜蛋白酶溶液（取木瓜蛋白酶，用蒸馏水溶解）和                            2.3.6  稳定性试验       取“2.3.2”项下供试品溶液，分别于
        0.5％的α-淀粉酶溶液（取α-淀粉酶，用蒸馏水溶解），在                      室温下放置10、20、30、40、50、60 min时按“2.3.3”项下方
        50 ℃水浴中酶解 1 h，煮沸 10 min 灭活，冷却；加入 4 倍               法显色后，以 50％乙醇为空白对照，采用紫外分光光度
        体积的 60％乙醇，醇沉 30 min 后，抽滤，收集滤液，回收                   计于 510 nm 波长处测定吸光度。结果显示，吸光度的
        乙醇至170～200 mL，用等体积乙酸乙酯萃取3次，每次                      RSD 为 2.42％（n＝6），表明供试品溶液于室温下放置
        30 min，收集萃取液，挥干溶剂，即得黄酮浸膏；滤渣干                       60 min内稳定性良好。
        燥至恒定质量 ，即得DF。                                      2.3.7  加样回收率试验         取苦杏仁皮粉末约 5 g，精密
                    [17]
        2.2  DF的含量测定                                       称定，共 6 份，分别加入“2.3.1”项下对照品贮备液 10
            参考相关文献 ，采用酶-重量法计算 DF 含量：DF                     mL，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.3”项
                        [16]

        中国药房    2022年第33卷第6期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 6  ·725 ·
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