Page 41 - 《中国药房》2022年6期

2018 年 3 月－2020 年 8 月，经贵州医科大学药学院生 2.1.6 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号
药学教研室刘春花副教授鉴定为萝藦科植物隔山消 S7），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1.1”项
C. auriculatum Royle ex Wight 的干燥块根。16 批隔山 下色谱条件进样测定，以青阳参苷元为参照，计算各共
消药材的来源信息见表1。 有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，29个共
表1 16批隔山消药材的来源信息 有峰相对保留时间的 RSD 为 0.07％～2.53％，相对峰面

编号 产地 批号 编号 产地 批号 积的 RSD 为 1.41～2.81％（n＝6），表明供试品溶液于室
S1 贵州贵阳 20180304 S9 贵州安顺 20190506 温下放置24 h内稳定性良好。
S2 贵州贵阳 20180817 S10 贵州安顺 20200623 2.1.7 指纹图谱的建立 取16批隔山消药材，按“2.1.3”
S3 贵州贵阳 20190319 S11 贵州凯里 20190428
S4 贵州贵阳 20200603 S12 贵州凯里 20190804 项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进
S5 贵州贵阳 20200611 S13 贵州凯里 20191106 样测定，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012
S6 贵州贵阳 20200619 S14 贵州凯里 20191126
S7 贵州兴义 20200810 S15 四川南充 20191120 版）》对所得隔山消的色谱图进行分析，以各成分色谱响
S8 贵州毕节 20180119 S16 云南个旧 20191121 应均较强的 S2 样品为参照图谱，采用中位数法生成对
2 方法与结果 照指纹图谱，设定时间窗宽度为 0.1 s，经多点校正和
2.1 隔山消药材的HPLC指纹图谱建立 mark峰匹配生成隔山消指纹图谱的共有模式并建立16
2.1.1 色谱条件 以ACE UExcel C18 （250 mm×4.6 mm， 批隔山消药材的叠加指纹图谱。结果显示，16批隔山消
5 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％磷酸溶液（B）为流动 药材共有 29 个共有峰。16 批隔山消药材的 HPLC 叠加
相进行梯度洗脱（0～5 min，10％A→15％A；5～25 min， 指纹图谱见图1，对照指纹图谱见图2。
15％A→30％A；25～35 min，30％A→42％A；35～55 min， 25
19 21
42％A→90％A；55～60 min，90％A；60～70 min，90％A→ 8 000 1 2 4 9 10 12 13 15 18 20 22 23 26 27 28
3 5 6 7 8 11 14 16 17 24 29
10％A）；流速为1.2 mL/min；检测波长为210 nm；柱温为 7 000 S16 S15
S14
6 000 S13
40 ℃；进样量为10 μL。 5 000 S12 S11
2.1.2 混合对照品溶液的制备 取丁香酸、去酰基萝藦 U/mV 4 000 S10 S9 S8
苷元、白首乌二苯酮、青阳参苷元对照品适量，精密称 3 000 S7 S6
2 000 S5 S4
定，加甲醇溶解并定容，制成上述4种成分质量浓度分别 1 000 S3 S2
S1
为45.778 0、152.281 0、41.085 0、930.662 0 µg/mL的混合 0 R
0 10 20 30 40 50 60
对照品溶液，于－20 ℃储存，备用。 t/min
图1 16批隔山消药材的HPLC叠加指纹图谱
2.1.3 供试品溶液的制备 取隔山消药材粉末（过60目
筛，下同），约 1.0 g，置于具塞锥形瓶中，加入 0.1 mol/L 1 600
盐酸6 mL、30％乙醇50 mL，加热回流提取4 h，滤过，用 1 400 25
1 200
30％乙醇 20 mL 洗涤滤渣，合并滤液和洗液，水浴挥至 1 000 1
近干，残渣加甲醇溶解并定容至5 mL，以20 000 r/min离 U/mV 800
心10 min，取上清液，即得供试品溶液。 600 2 15 21 22 23
400 18
2.1.4 精密度试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号 200 3 4 6 5 7 10 11 12 13 14 16 17 20 24 26 27 28
S7），按“2.1.1”项下色谱条件连续进样测定6次，以青阳 0 8 9 19 29
－200
参苷元为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰 0 10 20 30 40 50 60 70
面积。结果显示，29 个共有峰相对保留时间的 RSD 为 t/min
图2 隔山消药材的对照指纹图谱
0.02％～1.53％，相对峰面积的 RSD 为 0.56％～2.50％
（n＝6），表明方法精密度良好。 2.1.8 共有峰指认 取“2.1.2”项下混合对照品溶液，按
2.1.5 重复性试验 取隔山消药材（编号 S7）粉末 1.0 “2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图（图 3A）。
g，共 6 份，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶 将 16 批隔山消药材的 HPLC 叠加指纹图谱与上述混合
液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以青阳参苷元 对照品溶液色谱图进行对比，共指认了其中4个色谱峰，
为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。 分别为丁香酸（7号峰）、去酰基萝藦苷元（9号峰）、白首
结果显示，29个共有峰相对保留时间的RSD为0.15％～ 乌二苯酮（13号峰）、青阳参苷元（15号峰）。由于青阳参
1.41％，相对峰面积的RSD为1.20％～2.86％（n＝6），表 苷元（15号峰）的分离度较好、峰面积较稳定且保留时间
明方法重复性良好。 适中，故以其为参照。

中国药房 2022年第33卷第6期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 6 ·675 ·