Page 43 - 《中国药房》2022年5期

D（P＜0.05，P＜0.01）；ROS antioxidant NAC could reverse the down-regulation effects of curcumol on the expression of these
proteins（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS Curcumol may induce oxidative stress and cell arrest in G1 phase to inhibit the
proliferation of T47D cells.
KEYWORDS curcumol；breast cancer cells T47D；cell cycle arrest；cell proliferation；oxidative stress；mechanism

乳腺癌是最常见的恶性妇科肿瘤，且患病呈年轻化 （货号298-93-1）购自美国Amresco公司；二甲基亚砜（批
趋势，严重影响女性健康 [1－2] 。乳腺组织形成恶性细胞 号50116）购自天津百伦斯生物技术有限公司；实时荧光
是乳腺癌的特征，遗传基因突变、药物使用、饮食习惯及 定量聚合酶链反应（qRT-PCR）引物[包括细胞周期调控
[1]
环境因素均可诱发或加剧乳腺癌 。乳腺癌分子分型包 因子 p21（货号 HS150827022）、增殖细胞核抗原（prolif-
括 luminal A 型、luminal B 型、Her-2 阳性、基底细胞样 4 erating cell nuclear antigen，PCNA，货号 HS150827022）、
种亚型，主要采取化疗、放疗、内分泌治疗及靶向治疗等 细胞周期蛋白依赖性激酶 2（cyclin dependent kinase 2，
策略，其中化疗和靶向治疗是晚期乳腺癌的主要治疗方 CDK2，货号 HS151104006）、β-肌动蛋白（β-actin，货号
法，但药物产生的不良反应和耐药性严重影响治疗效果 HXP08271730609）]购自美国 Invitrogen 公司；BCA 蛋白
[1]
和患者的生存质量 。中药因其低毒性、多靶点的特性， 定量检测试剂盒（批号080919191105）、抗氧化剂N-乙酰
被广泛用作抗肿瘤增敏剂及耐药逆转剂 [3－4] 。很多从天 半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC，批号111015160224）购
然植物中分离得到的提取物具有明显抑制肿瘤细胞增 自上海碧云天生物科技有限公司；ECL 发光试剂盒（批
殖的作用，为临床防治肿瘤提供了新的选择，也为天然 号 1824c03）购 自 美 国 Affinity 公 司 ；吐 温 20（批 号
[5]
产物开发及道地药材现代化提供了新的思路 。 20200820）购自天津市致远化学试剂有限公司；核转录
莪术Curcuma zedoaria Rosc.是常用的中药，具有行 因 子 E2- 相 关 因 子（nucler transcription factor E2-relat-
气解郁、破瘀、止痛的功效，常用于治疗血气心痛、食积 ed factor，Nrf2，批号 333778）、Kelch 样 ECH 关联蛋白 1
胀痛、瘀血经闭 。莪术醇是从莪术挥发油中提取的倍 （Kelch-like ECH associated protein 1，Keap1，批 号
[6]
半萜类化合物，具有良好的抗肿瘤活性。笔者团队前期 333865）购自艾比玛特生物医药（上海）有限公司；细胞
研究表明，莪术醇对肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、肝癌等恶性 周期抗体 CDK6、CDK2、细胞周期蛋白 D（Cyclin D）（批
肿瘤细胞均有良好的抑制效果 [7－10] ，但其抗乳腺癌机制 号 GR3317473-1）购自英国 Abcam 公司；β-actin 抗体（批
尚未阐明。因此，本研究以人 T47D 乳腺癌细胞为研究 号 17AVO412）购自北京中杉金桥生物技术有限公司；
对象，探讨莪术醇影响 T47D 乳腺癌细胞增殖的作用机 PCNA 抗体（批号 AF0239）购自美国 Affinity 公司；核糖
制，为莪术醇的临床应用提供一定的理论依据。 核酸酶A（RNase A，货号ZS103-L）购自北京庄盟国际生
1 材料 物基因科技有限公司；Annexin Ⅴ-FITC/PI 试剂盒（批号
1.1 仪器 9057689）购 自 美 国 BD 公 司 ；DCFH-DA 探 针（货 号
Infinite M200 PRO 型酶标仪购自瑞士 Tecan 公司； 38483-26-0）购自江苏凯基生物技术股份有限公司；
CKX 31 型倒置相差显微镜购自日本 Olympus 公司； Trizol试剂（批号W9208）购自北京天根生化科技有限公
ClassⅡ BSC型生物安全柜购自新加坡Esco科技有限公 司；三氯甲烷（货号67-66-3）购自成都市科隆化学有限公
司；Accuri TM C6 Plus 型流式细胞仪购自美国 BD 公司； 司；丙烯酰胺（批号 691259610）购自合肥白鲨生物科技
CFX Manager 3.0软件、Power Pac TM Basic型蛋白电泳系 有限公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG二抗（批
统、Western blot 系统、Chemi Doc TM XRS+化学发光凝胶 号EM35110-01）购自北京依玛博科技有限公司；辣根过
成像系统购自美国Bio-Rad公司；Biofuge Stratos型低温 氧化物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（货号 A27036）购自
高速离心机购自美国Thermo Fisher Scientific公司。 美国Thermo Fisher Scientific公司。
1.2 药物与试剂 1.3 细胞株
莪术醇（纯度＞99％，批号 C100409）购自贵州迪大 本研究所用人T47D乳腺癌细胞株购自中科院上海
科技有限责任公司；无水乙醇（货号64-17-5）购自成都市 生命科学研究院细胞资源中心。
科隆化工试剂厂；DMEM 高糖培养基（批号8115027）购 2 方法
自美国 Gibco 公司；小牛血清（货号 FB15015）购自美国 2.1 细胞培养与传代
Clark Cooper 公司；青链霉素混合液（货号 P1400）、制胶 T47D乳腺癌细胞培养于37 ℃、5％CO2饱和湿度的
剂（货号A1010）、胰蛋白酶（批号510T0414）和磷酸盐缓 DMEM高糖培养基（含10％小牛血清、青霉素100 U/mL、
冲液（PBS，批号20200604）购自北京索莱宝科技有限公 链霉素100 g/L）中。在细胞融合度为80％～90％时，用
司；乙二胺四乙酸二钠（货号 6381-92-6）、异丙醇（批号 0.25％胰蛋白酶和0.5 mmol/L乙二胺四乙酸的混合液消
1912191）购自汕头市西陇化工股份有限公司；MTT试剂 化传代，取对数生长期细胞进行实验。

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