Page 42 - 《中国药房》2022年5期

莪术醇抗T47D乳腺癌细胞增殖的作用机制研究 Δ

周璐炜 ，王 娟 ，陈 旭 （1.桂林医学院药学院生药学重点实验室，广西 桂林 541100；2.桂林医学院基础
1，2
1＊
1 #
医学院，广西 桂林 541100）
中图分类号 R73-3；R96 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）05-0548-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.05.07

摘 要 目的 研究莪术醇抗 T47D 乳腺癌细胞增殖的作用机制。方法 采用 MTT 法检测不同剂量莪术醇（0、6.25、12.5、25、50、
100 μg/mL）对T47D乳腺癌细胞增殖的抑制作用。以莪术醇（12.5、25、50、100 μg/mL）干预T47D乳腺癌细胞后，采用倒置相差显
微镜观察细胞形态；采用流式细胞仪检测细胞周期及活性氧（ROS）水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测增殖
细胞核抗原（PCNA）、细胞周期调控因子p21和细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）的mRNA表达水平；采用Western blot法检测
CDK2、CDK6、细胞周期蛋白D（Cyclin D）、PCNA、核转录因子E2-相关因子（Nrf2）、Kelch样ECH关联蛋白1（Keap1）的蛋白表达
水平。另将细胞分为2组，其中一组加入不同剂量莪术醇，另外一组加入33 μg/mL莪术醇干预6、12、24、48 h，根据以上2组结果确
定最佳氧化时间和给药浓度后，另设空白对照组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组（单用ROS抗氧化剂NAC）、莪术醇组（单用莪术醇）、
莪术醇联合NAC组（采用ROS抗氧化剂NAC预处理，再加入莪术醇），检测细胞周期及ROS荧光强度。结果 莪术醇能使T47D乳
腺癌细胞增殖抑制率显著升高（P＜0.05或P＜0.01），并呈一定的剂量和时间依赖趋势。莪术醇能将T47D乳腺癌细胞周期阻滞于
G1期，并使ROS水平显著增加（P＜0.05或P＜0.01）；ROS抗氧化剂NAC能够逆转莪术醇的上述诱导作用（P＜0.01）。qRT-PCR结
果显示，莪术醇能下调PCNA和CDK2 mRNA的表达，并上调p21 mRNA的表达（P＜0.05或P＜0.01）。Western blot结果显示，莪
术醇能显著下调Keap1、Nrf2、CDK2、CDK6和Cyclin D的蛋白表达（P＜0.05或P＜0.01）；ROS抗氧化剂NAC能够逆转莪术醇对
上述蛋白表达的下调作用（P＜0.05或P＜0.01）。结论 莪术醇可能通过诱导氧化应激和细胞周期阻滞，发挥抑制T47D乳腺癌细
胞增殖的作用。
关键词 莪术醇；T47D乳腺癌细胞；细胞周期阻滞；细胞增殖；氧化应激；作用机制

Study on the mechanism of curcumol inhibiting the proliferation of breast cancer cells T47D
1，2
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1
ZHOU Luwei ，WANG Juan ，CHEN Xu（1. Key Laboratory of Pharmacognosy，College of Pharmacy，Guilin
Medical University，Guangxi Guilin 541100，China；2. School of Basic Medicine，Guilin Medical University，
Guangxi Guilin 541100，China）
ABSTRACT OBJECTIVE To study the mechanism of curcumol inhibiting the proliferation of breast cancer cells T47D.
METHODS MTT assay was used to detect the inhibitory effects of different doses of curcumol（0，6.25，12.5，25，50，100
μg/mL）on the proliferation of T47D cells. After treated with curcumol（12.5，25，50，100 μg/mL），the morphology of T47D cells
was observed by inverted phase contrast microscope. The cell cycle and the levels of reactive oxygen species（ROS）were detected
by flow cytometry. Quantitative real-time PCR（qRT-PCR）was used to detect the expressions of proliferating cell nuclear antigen
（PCNA），cell cycle regular p21 and cyclin-dependent kinase 2（CDK2）mRNA. Western blot assay was used to detect the protein
expression of CDK2，CDK6，Cyclin D，PCNA，nucler transcription factor E2-related factor（Nrf2）and Kelch-like ECH associated
protein 1（Keap1）. Breast cancer cells T47D were divided into 2 groups，one group was given different doses of curcumol，and
another group was given curcumol 33 μg/mL for 6，12，24，48 h. After the optimal oxidation time and administration concentration
were determined according to the results of the above two groups，the blank control group，N-acetylcysteine（NAC）group（ROS
antioxidant NAC alone），curcumol group （curcumol alone），curcumol combined with NAC group （pretreatment with ROS
antioxidant NAC，and then adding into curcumol）. Cell cycle and fluorescence intensity of ROS were detected. RESULTS
Curcumol could significantly increase the inhibitory rate of the proliferation of T47D cells（P＜0.05 or P＜0.01），and showed a
certain dose and time dependent trend. Curcumol blocked the
Δ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目（No.82002822，
cycle in the G1 phase and significantly increased the level of
No.81760663）；第四批八桂学者2017年专项经费（No.桂财教函〔2017〕
ROS （P＜0.05 or P＜0.01）；ROS antioxidant NAC could
143 号）；广西科技计划项目（No.桂科 ZD20302006）；桂林医学院硕士
significantly reverse above inductive effect of curcumol（P＜
研究生科研项目（No.GYYK2021006）
＊硕士研究生。研究方向：生药学。E-mail：zhouluwei0810@163. 0.01）. qRT-PCR showed that curcumol down-regulated the
com expression of PCNA and CDK2 mRNA and up-regulated the
# 通信作者：教授，博士生导师，博士。研究方向：天然药物的靶 expression of p21 mRNA（P＜0.05 or P＜0.01）. Western blot
标筛选及分子药理学。电话：0773-5898018。E-mail：chenxu@glmc. assay showed that curcumol significantly down-regulated the
edu.cn protein expression of Keap1，Nrf2，CDK2，CDK6 and Cyclin

·548 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 中国药房 2022年第33卷第5期