Page 40 - 《中国药房》2022年5期

Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平， 从而减轻谷氨酸诱导的神经细胞损伤，抑制炎症反应从
LDH 释放量和 MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 水平显著升高 而改善脑缺血再灌注损伤大鼠的学习记忆能力 [12－14] 。
（P＜0.05）。结果见图4、表6。 本研究结果显示，H/R诱导后H9c2心肌细胞的凋亡率和
4 讨论 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平升
[15]
研究表明，心肌细胞炎症反应、氧化应激及过度凋 高，与既往研究结果相似 ，提示成功建立心肌缺血再
亡等均与心肌缺血再灌注损伤有关，但其病因及致病机 灌注损伤模型；给予类叶升麻苷可减少H/R诱导的H9c2
[9]
制尚未完全阐明 。临床常采用药物、介入与外科手术 心肌细胞的凋亡，且呈剂量依赖性，提示类叶升麻苷可
等进行治疗，可改善心肌缺血症状，但不能从根本上治 抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡。本研究还发现，类叶升
愈心肌缺血再灌注损伤；而中药的副作用较小、治疗效 麻苷能逆转 H/R 诱导的 H9c2 心肌细胞中 LDH 释放量、
果较好，可减轻心肌缺血再灌注损伤，但其作用机制尚 MDA 水平升高，SOD 活性降低，与既往研究结果相
[16]
未阐明 [10－11] 。 似 ，提示类叶升麻苷可抑制 H/R 诱导的心肌细胞的氧
类叶升麻苷可通过增强乙酰胆碱转移酶活性从而 化应激反应从而减轻细胞氧化损伤；同时，类叶升麻苷
减轻缺糖缺氧诱导的神经细胞损伤，抑制氧化应激反应 能逆转 H/R 诱导的 H9c2 心肌细胞中 TNF-α、IL-1β、IL-6
10 7 10 7
Rnd3 29 kDa
10 6 10 6
NF-κB p65 75 kDa
PIPE-A 10 5 PIPE-A 10 5
Cleaved Caspase-3 32 kDa
10 4 10 4

10 3 10 3 Cleaved Caspase-9 46 kDa
0 0
0 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 0 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 GAPDH 36 kDa
Annexin FITC-A Annexin FITC-A
H/R+pcDNA组 H/R+pcDNA-
H/R+pcDNA组 H/R+pcDNA-Rnd3组 Rnd3组
A. 流式细胞图 B.Western blot电泳图
图3 Rnd3过表达前后的凋亡流式细胞图和相关蛋白表达电泳图
表5 Rnd3过表达对H/R诱导H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应的影响（x±±s，n＝9）
NF-κB p65 细胞凋亡 Cleaved Cleaved LDH/ MDA/ SOD/ TNF-α/ IL-1β/ IL-6/
组别 Rnd3蛋白
蛋白 率/％ Caspase-3蛋白 Caspase-9蛋白 （U/L） （nmol/mL） （U/mL） （μg/mL） （μg/mL） （pg/mL）
H/R+pcDNA组 0.23±0.02 0.91±0.03 27.42±4.59 0.91±0.03 0.93±0.04 91.44±5.90 58.78±3.92 13.62±1.13 883.23±44.77 602.94±61.48 186.54±6.42
H/R+pcDNA-Rnd3组 0.47±0.03 0.66±0.05 19.09±0.85 0.66±0.03 0.72±0.04 64.41±4.81 39.35±2.03 25.22±2.49 637.64±39.03 404.83±32.35 147.68±6.96
t 19.969 12.862 5.353 17.678 11.137 10.653 13.204 12.727 12.405 8.555 12.312
P ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

10 7 10 7 Rnd3 29 kDa
10 6 10 6
NF-κB p65 75 kDa
PIPE-A 10 5 PIPE-A 10 5 Cleaved Caspase-3 32 kDa

10 4 10 4
Cleaved Caspase-9 46 kDa
10 3 10 3
0 0
GAPDH 36 kDa
0 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 0 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7
Annexin FITC-A Annexin FITC-A H/R+AS-H+ H/R+AS-H+
H/R+AS-H+si-NC组 H/R+AS-H+si-Rnd3组 si-NC组 si-Rnd3组
A. 流式细胞图 B.Western blot电泳图
图4 抑制Rnd3过表达前后类叶升麻苷作用下的凋亡流式细胞图和相关蛋白表达电泳图

表6 抑制Rnd3过表达前后类叶升麻苷对H/R诱导H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应的影响（x±±s，n＝9）
NF-κB p65 细胞凋亡 Cleaved Cleaved LDH/ MDA/ SOD/ TNF-α/ IL-1β/ IL-6/
组别 Rnd3蛋白
蛋白 率/％ Caspase-3蛋白 Caspase-9蛋白 （U/L） （nmol/mL） （U/mL） （μg/mL） （μg/mL） （pg/mL）
H/R+AS-H+si-NC组 0.73±0.02 0.38±0.05 12.03±0.78 0.41±0.06 0.44±0.02 33.20±2.36 24.55±1.85 46.37±1.90 426.77±16.02 232.36±20.11 106.10±8.63
H/R+AS-H+si-Rnd3组 0.55±0.03 0.65±0.02 17.31±0.67 0.57±0.04 0.71±0.04 54.24±2.92 35.91±3.91 29.57±3.29 587.83±17.42 362.30±14.97 142.01±9.69
t 14.977 15.041 15.405 6.656 18.112 16.812 7.879 13.266 20.416 15.549 8.302
P ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

·546 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 中国药房 2022年第33卷第5期