Page 85 - 《中国药房》2022年3期
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表3   诃子生品及其炮制品中4种成分含量的测定结果                                   表4 粪便隐血检测结果判断标准
            (n=2,mg/g)                                      评分                  结果判断
        样品           没食子酸      诃黎勒酸      诃子酸      鞣花酸       0                   滴加试剂2 min后仍不显色
        诃子生品          3.086 9  142.864 2  102.432 1  13.408 6  1                滴加试剂10 s后,由浅蓝色渐变蓝色
        160 ℃下诃子炮制品   3.711 5  125.149 2  87.948 0  10.998 3  2                 滴加试剂后初显浅蓝褐色,逐渐呈明显蓝褐色
        180 ℃下诃子炮制品   4.296 5  116.068 7  59.640 0  11.295 3  3                 滴加试剂后立即呈现蓝褐色
        200 ℃下诃子炮制品   9.123 5   88.842 7  45.037 6  21.890 5  4                 肉眼可见血便
        220 ℃下诃子炮制品   9.250 2   86.783 2  41.632 3  24.861 1  表5  各组小鼠体质量相对率及粪便隐血检测评分(x±±
        240 ℃下诃子炮制品   9.820 7   14.722 2  7.866 1  31.273 3
        260 ℃下诃子炮制品   9.266 7   13.000 2  5.679 2  38.864 3      s,n=10)
        280 ℃下诃子炮制品   2.745 6   12.157 9  <0.000 1  35.696 9  组别             体质量相对率/%          粪便隐血评分/分
        300 ℃下诃子炮制品   2.153 8   7.933 8  <0.000 1  19.852 3  空白组              115.64±4.27        0.00±0.00
        2.7 药效实验                                            模型组               95.89±4.76 a       2.00±1.10 a
                                                            美沙拉嗪肠溶片组          116.12±5.83 b      0.40±0.52 b
        2.7.1  分组、造模与给药        将小鼠按随机对照原则分为                 诃子生品组             106.27±5.46 b      0.67±0.50 b
        空白组、模型组、美沙拉嗪肠溶片组(阳性对照,0.4 g/kg,                     诃子160 ℃组          107.41±5.05 b      0.78±0.83 b
        剂量根据临床等效剂量换算而得)和诃子生品及不同温                            诃子180 ℃组          105.78±4.99 b      0.67±0.50 b
                                                            诃子200 ℃组          106.75±5.76 b      0.44±0.53 b
        度炮制品组[诃子各组给药剂量均为1.3 g/kg,根据2020
                                                            诃子220 ℃组          106.16±4.28 b      0.89±0.60 b
        年版《中国药典》(一部)中诃子最大服用剂量与小鼠体                           诃子240 ℃组          107.41±7.51 b      0.44±0.53 b
        表系数换算而得],每组 10 只。模型组和诃子各组小鼠                         诃子260 ℃组          110.92±5.67 b      0.22±0.44 b
                                                            诃子280 ℃组          108.01±3.82 b      0.33±0.50 b
        均参考文献[11]方法建立UC模型,具体方法如下:小鼠
                                                            诃子300 ℃组          107.84±5.03 b      0.11±0.33 b
        禁食不禁水 24 h 后,腹腔注射 20%乌拉坦麻醉后,将 16
                                                               a:与空白组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01
        号钝化针头抹上甘油,缓缓插入肛门3~4 cm处,一次性
        注入6%乙酸0.1 mL;捏住肛门计时20 s后,同法注入生                     生理盐水冲洗掉血污,用吸水纸吸干生理盐水后,测量
        理盐水2 mL进行冲洗,然后将小鼠放回鼠笼,待其静躺                         每只小鼠结直肠长度,并称定质量,计算结直肠指数(结
                                                                                            [13]
                                                           直肠指数=结直肠质量/小鼠体质量) 。结果显示,与
        至清醒。空白组小鼠肛门注入等量生理盐水,其余操作
        同上。以小鼠毛色晦暗、腹泻及聚堆现象明显、粪便隐                           空白组比较,模型组小鼠结直肠长度显著缩短、结直肠
        血检测示阳性为标准判定造模成功 。造模成功后,空                           指数显著升高(P<0.01);与模型组比较,诃子各组小鼠
                                      [12]
                                                           结直肠长度显著增加、结直肠指数显著降低(P<0.01),
        白组和模型组小鼠灌胃水,其余各组小鼠均灌胃相应药
        液,给药体积均为20 mL/kg,每天1次,连续7 d。                       详见表6。
        2.7.2  统计学方法       采用 SPSS 17.0 软件进行统计分            表 6   各组小鼠结直肠长度及结直肠指数的检测结果
        析,数据以x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,                              (x±±s,n=10)
        组间两两比较采用LSD检验。检验水准α=0.05。                           组别               结直肠长度/cm          结直肠指数/×10 -2
                                                            空白组               10.98±0.81         1.44±0.09
        2.7.3  一般体征观察       每日观察各组小鼠一般体征并                   模型组               8.70±0.69 a        1.79±0.16 a
        记录体质量的变化,计算实验7 d后的体质量相对率(体                          美沙拉嗪肠溶片组          10.88±0.76 b       1.57±0.52 b
        质量相对率=小鼠当日体质量/小鼠实验第1天体质量×                           诃子生品组             10.28±0.63 b       1.56±0.10 b
                                                            诃子160 ℃组          10.02±0.53 b       1.50±0.12 b
        100%);收集各组小鼠每日粪便进行隐血检测 :将粪
                                                 [12]
                                                            诃子180 ℃组          10.07±0.60 b       1.49±0.11 b
        便放在培养皿上,滴加邻联甲苯胺溶液 2~3 滴,再滴加                         诃子200 ℃组          10.34±0.53 b       1.49±0.12 b
        3%过氧化氢2~3滴,立即观察显色结果,并根据表4中                          诃子220 ℃组          10.48±0.44 b       1.51±0.16 b
        的粪便隐血检测结果判断标准进行判断。结果显示,各                            诃子240 ℃组          10.54±0.61 b       1.51±0.08 b
                                                            诃子260 ℃组          10.72±0.38 b       1.51±0.18 b
        组小鼠实验前一般体征及体质量无显著差异,粪便隐血
                                                            诃子280 ℃组          10.76±0.69 b       1.49±0.08 b
        检测均为阴性。实验7 d后,与空白组比较,模型组小鼠                          诃子300 ℃组          10.39±0.26 b       1.52±0.07 b
        体质量显著降低(P<0.01),粪便隐血检测结果为阳性,                           a:与空白组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01
        且隐血评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,诃子                        2.7.5  结直肠组织病理形态学观察               结直肠长度及质
        各组小鼠体质量均显著升高(P<0.01),粪便隐血检测                        量测定完毕后,迅速剪取结直肠组织进行切片和苏木
        结果为阳性,但隐血评分均显著降低(P<0.01),详见                        素-伊红染色,然后采用显微镜观察该组织的病理形态
        表 5。                                               学改变。结果显示,模型组小鼠结直肠组织可见少量红
        2.7.4  结直肠长度及结直肠指数检测              末次给药后,各          细胞,固有层腺体隐窝结构损伤严重,并有大量炎症细
        组小鼠禁食不禁水24 h,摘眼球取血,血样以3 000 r/min                  胞浸润;与模型组比较,诃子各组小鼠结直肠组织腺体
        离心10 min,吸取上清液,备用。小鼠取血后,迅速脱颈                       隐窝结构被修复,炎症细胞浸润减少,详见图2。
        处死,剖开腹腔,剥离肛门到盲肠段组织(即结直肠),用                         2.7.6 小鼠血清中炎症细胞因子水平检测 取“2.7.4”项


        中国药房    2022年第33卷第3期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3  ·335 ·
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