Page 85 - 《中国药房》2022年3期
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表3 诃子生品及其炮制品中4种成分含量的测定结果 表4 粪便隐血检测结果判断标准
(n=2,mg/g) 评分 结果判断
样品 没食子酸 诃黎勒酸 诃子酸 鞣花酸 0 滴加试剂2 min后仍不显色
诃子生品 3.086 9 142.864 2 102.432 1 13.408 6 1 滴加试剂10 s后,由浅蓝色渐变蓝色
160 ℃下诃子炮制品 3.711 5 125.149 2 87.948 0 10.998 3 2 滴加试剂后初显浅蓝褐色,逐渐呈明显蓝褐色
180 ℃下诃子炮制品 4.296 5 116.068 7 59.640 0 11.295 3 3 滴加试剂后立即呈现蓝褐色
200 ℃下诃子炮制品 9.123 5 88.842 7 45.037 6 21.890 5 4 肉眼可见血便
220 ℃下诃子炮制品 9.250 2 86.783 2 41.632 3 24.861 1 表5 各组小鼠体质量相对率及粪便隐血检测评分(x±±
240 ℃下诃子炮制品 9.820 7 14.722 2 7.866 1 31.273 3
260 ℃下诃子炮制品 9.266 7 13.000 2 5.679 2 38.864 3 s,n=10)
280 ℃下诃子炮制品 2.745 6 12.157 9 <0.000 1 35.696 9 组别 体质量相对率/% 粪便隐血评分/分
300 ℃下诃子炮制品 2.153 8 7.933 8 <0.000 1 19.852 3 空白组 115.64±4.27 0.00±0.00
2.7 药效实验 模型组 95.89±4.76 a 2.00±1.10 a
美沙拉嗪肠溶片组 116.12±5.83 b 0.40±0.52 b
2.7.1 分组、造模与给药 将小鼠按随机对照原则分为 诃子生品组 106.27±5.46 b 0.67±0.50 b
空白组、模型组、美沙拉嗪肠溶片组(阳性对照,0.4 g/kg, 诃子160 ℃组 107.41±5.05 b 0.78±0.83 b
剂量根据临床等效剂量换算而得)和诃子生品及不同温 诃子180 ℃组 105.78±4.99 b 0.67±0.50 b
诃子200 ℃组 106.75±5.76 b 0.44±0.53 b
度炮制品组[诃子各组给药剂量均为1.3 g/kg,根据2020
诃子220 ℃组 106.16±4.28 b 0.89±0.60 b
年版《中国药典》(一部)中诃子最大服用剂量与小鼠体 诃子240 ℃组 107.41±7.51 b 0.44±0.53 b
表系数换算而得],每组 10 只。模型组和诃子各组小鼠 诃子260 ℃组 110.92±5.67 b 0.22±0.44 b
诃子280 ℃组 108.01±3.82 b 0.33±0.50 b
均参考文献[11]方法建立UC模型,具体方法如下:小鼠
诃子300 ℃组 107.84±5.03 b 0.11±0.33 b
禁食不禁水 24 h 后,腹腔注射 20%乌拉坦麻醉后,将 16
a:与空白组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01
号钝化针头抹上甘油,缓缓插入肛门3~4 cm处,一次性
注入6%乙酸0.1 mL;捏住肛门计时20 s后,同法注入生 生理盐水冲洗掉血污,用吸水纸吸干生理盐水后,测量
理盐水2 mL进行冲洗,然后将小鼠放回鼠笼,待其静躺 每只小鼠结直肠长度,并称定质量,计算结直肠指数(结
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直肠指数=结直肠质量/小鼠体质量) 。结果显示,与
至清醒。空白组小鼠肛门注入等量生理盐水,其余操作
同上。以小鼠毛色晦暗、腹泻及聚堆现象明显、粪便隐 空白组比较,模型组小鼠结直肠长度显著缩短、结直肠
血检测示阳性为标准判定造模成功 。造模成功后,空 指数显著升高(P<0.01);与模型组比较,诃子各组小鼠
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结直肠长度显著增加、结直肠指数显著降低(P<0.01),
白组和模型组小鼠灌胃水,其余各组小鼠均灌胃相应药
液,给药体积均为20 mL/kg,每天1次,连续7 d。 详见表6。
2.7.2 统计学方法 采用 SPSS 17.0 软件进行统计分 表 6 各组小鼠结直肠长度及结直肠指数的检测结果
析,数据以x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析, (x±±s,n=10)
组间两两比较采用LSD检验。检验水准α=0.05。 组别 结直肠长度/cm 结直肠指数/×10 -2
空白组 10.98±0.81 1.44±0.09
2.7.3 一般体征观察 每日观察各组小鼠一般体征并 模型组 8.70±0.69 a 1.79±0.16 a
记录体质量的变化,计算实验7 d后的体质量相对率(体 美沙拉嗪肠溶片组 10.88±0.76 b 1.57±0.52 b
质量相对率=小鼠当日体质量/小鼠实验第1天体质量× 诃子生品组 10.28±0.63 b 1.56±0.10 b
诃子160 ℃组 10.02±0.53 b 1.50±0.12 b
100%);收集各组小鼠每日粪便进行隐血检测 :将粪
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诃子180 ℃组 10.07±0.60 b 1.49±0.11 b
便放在培养皿上,滴加邻联甲苯胺溶液 2~3 滴,再滴加 诃子200 ℃组 10.34±0.53 b 1.49±0.12 b
3%过氧化氢2~3滴,立即观察显色结果,并根据表4中 诃子220 ℃组 10.48±0.44 b 1.51±0.16 b
的粪便隐血检测结果判断标准进行判断。结果显示,各 诃子240 ℃组 10.54±0.61 b 1.51±0.08 b
诃子260 ℃组 10.72±0.38 b 1.51±0.18 b
组小鼠实验前一般体征及体质量无显著差异,粪便隐血
诃子280 ℃组 10.76±0.69 b 1.49±0.08 b
检测均为阴性。实验7 d后,与空白组比较,模型组小鼠 诃子300 ℃组 10.39±0.26 b 1.52±0.07 b
体质量显著降低(P<0.01),粪便隐血检测结果为阳性, a:与空白组比较,P<0.01;b:与模型组比较,P<0.01
且隐血评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,诃子 2.7.5 结直肠组织病理形态学观察 结直肠长度及质
各组小鼠体质量均显著升高(P<0.01),粪便隐血检测 量测定完毕后,迅速剪取结直肠组织进行切片和苏木
结果为阳性,但隐血评分均显著降低(P<0.01),详见 素-伊红染色,然后采用显微镜观察该组织的病理形态
表 5。 学改变。结果显示,模型组小鼠结直肠组织可见少量红
2.7.4 结直肠长度及结直肠指数检测 末次给药后,各 细胞,固有层腺体隐窝结构损伤严重,并有大量炎症细
组小鼠禁食不禁水24 h,摘眼球取血,血样以3 000 r/min 胞浸润;与模型组比较,诃子各组小鼠结直肠组织腺体
离心10 min,吸取上清液,备用。小鼠取血后,迅速脱颈 隐窝结构被修复,炎症细胞浸润减少,详见图2。
处死,剖开腹腔,剥离肛门到盲肠段组织(即结直肠),用 2.7.6 小鼠血清中炎症细胞因子水平检测 取“2.7.4”项
中国药房 2022年第33卷第3期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3 ·335 ·