Page 83 - 《中国药房》2022年3期

诃子为使君子科植物诃子 Terminalia chebula Retz. 法科技开发有限公司（纯度均大于 98％，批号分别为
或绒毛诃子 T. chebula Retz. var. tomentella Kurt.的干燥 PRF8112302、PRF8071201）；甲醇、磷酸为色谱纯，乙酸、
成熟果实，收载于2020年版《中国药典》（一部），具有涩 甲醛为分析纯，水为超纯水。
肠止泻、敛肺利咽的功效 。《本经逢原》中记载“诃子，苦 1.3 动物
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涩降敛，生用清金止嗽，煨熟固肠止泻……”。诃子煨 本研究所用动物为SPF级昆明小鼠，共120只，雌雄
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后药性缓和，敛涩之性增强，可用于治疗久泻、久痢，即中 各半，体质量为（20±2）g，购自辽宁长生生物技术有限
医的“肠澼” ，与现代临床的溃疡性结肠炎（ulcerative 公司，动物生产许可证号为SCXK（辽）2020-0001。小鼠
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colitis，UC）相对应。UC是一种复发性较强的慢性消化 饲养于温度（23±2）℃、相对湿度（55±10）％的动物房
道疾病，西医治疗UC的药物包括氨基水杨酸制剂、糖皮 内，每12 h昼夜交替，期间自由进食、饮水，适应性饲养1
质激素、免疫抑制剂、微生物制剂以及生物制剂等，这些 周后进行后续实验。
药物均具有起效迅速、近期临床缓解率高等优点，但长 2 方法与结果
期服用则具有较大副作用，且药效不稳定，可对患者机 2.1 诃子不同温度炮制品的制备
[5]
体造成负面影响 。中医药将辨证与辨病相结合来治疗 取诃子全果 8 份，每份 100 g，置于加满净河砂的炒
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UC，具有疗效确切、不良反应少等优点 。有研究表明， 锅中，分别于 160、180、200、220、240、260、280、300 ℃条
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中医药临床治疗 UC 的方药中，诃子的使用频率较高 ； 件下翻埋6 min，取出放凉，即得。
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也有研究证明，单味诃子对 UC 有一定治疗作用 ；但对 2.2 供试品溶液的制备
于诃子抗 UC 的有效成分未见相关报道。相关研究发 取诃子生品及“2.1”项下所制诃子炮制品，去核，留
现，鞣质是诃子的主要成分，其含量约 23.6％～37.4％， 果肉，粉碎，过 65 目筛。精密称取上述药材粉末 0.1 g，
其中，没食子酸、诃黎勒酸、诃子酸、鞣花酸是鞣质中含 加入 70％甲醇溶液 50 mL，精密称定质量，超声（功率
量较高的几种成分 [9－10] 。因此，本实验采用砂烫法煨制 250 W，频率40 kHz）提取20 min；放冷，以70％甲醇溶液
诃子，制备不同温度的炮制品，并采用高效液相色谱法 补足损失质量，摇匀，滤过；取续滤液2 mL定容至10 mL
测定其中没食子酸、诃黎勒酸、诃子酸和鞣花酸的含量， 量瓶中，再经0.22 µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
然后通过UC模型小鼠实验比较诃子不同温度炮制品的 2.3 对照品溶液的制备
抗UC效果，以期为临床治疗UC提供参考。 分别精密称取没食子酸、诃黎勒酸、诃子酸、鞣花酸
1 材料 的对照品适量，置于10 mL量瓶中，加入甲醇定容，制成
1.1 主要仪器 上述4种成分质量浓度分别为0.222 5、0.418 0、0.463 0、
本研究所用主要仪器有 1100 型高效液相色谱系统 0.177 5 mg/mL 的单一对照品溶液。取上述各单一对照
（美国Agilent公司）、FA1004B型分析天平（上海精密科学 品溶液适量，加甲醇稀释，制成上述4种成分质量浓度分
仪器有限公司）、Multiskan MK3 型酶标仪（美国 Thermo 别为0.011 1、0.135 9、0.150 5、0.037 2 mg/mL的混合对照
Fisher Scientific 公司）、Fresco 型台式高速冷冻离心机 品溶液。
（德国Heraeus公司）。 2.4 色谱条件
1.2 主要药品与试剂 色谱柱为 Dikma Platisil（250 mm×4.6 mm，5 µm）；
诃子药材购自河北安国药材市场，产地为云南，经 流动相为 0.1％磷酸溶液（A）-甲醇（B）（梯度洗脱：0～5
辽宁中医药大学药学院翟延君教授鉴定为使君子科植 min，5％B→10％B；5～10 min，10％B→12％B；10～15
物诃子T. chebula Retz.的干燥成熟果实。美沙拉嗪肠溶 min，12％B→20％B；15～25 min，20％B；25～27 min，
片（批号 20200901，规格 0.25 g）购自黑龙江天宏药业股 20％B→32％B；27～35 min，32％B；35～37 min，32％B→
份有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， 35％B；37～42 min，35％B；42～45 min，35％B→42％B；
SOD）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent 45～55 min，42％B；55～57 min，42％B→45％B；57～
assay，ELISA）试剂盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA） 62 min，45％B；62～70 min，45％B→100％B）；进样量为
ELISA 试剂盒、白细胞介素 10（interleukin 10，IL-10） 10 μL；流速为 1 mL/min；柱温为 25 ℃；检测波长为 270
ELISA 试剂盒、IL-1β ELISA 试剂盒、肿瘤坏死因子α nm。
（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）ELISA 试剂盒均购 2.5 方法学考察
自上海科兴生物科技有限公司（批号分别为 F2389-A、 2.5.1 专属性试验 取“2.2”项下供试品溶液（以诃子生
F9261-A、F2176-A、F2040-A、F2132-A）；没食子酸、鞣花 品制备）、“2.3”项下混合对照品溶液和空白溶液（70％甲
酸的对照品均购自成都曼思特生物科技有限公司（纯度 醇），按“2.4”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。结果
均 大 于 98％ ，批 号 分 别 为 MUST-13040103、MUST- 显示，对照品溶液与供试品溶液色谱图中各待测成分的
14031010）；诃黎勒酸、诃子酸的对照品均购自成都普瑞 色谱峰与相邻峰分离良好，详见图1。

中国药房 2022年第33卷第3期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3 ·333 ·