Page 91 - 《中国药房》2021年22期

溶液。 均不高于9.30％，RE为－6.70％～5.04％，符合生物样品
[15]
2.3 血浆样品的预处理 定量分析的相关要求 。结果见表1。
取血浆样品 50 µL，置于 1.5 mL 的离心管中，加入 2.4.4 稳定性试验 按“2.2.2”项下方法制备 10、50、
“2.2.3”项下内标溶液 150 µL，涡旋混匀 2 min，以 12 000 200 ng/mL 的质控样品溶液，分别于室温下放置 24 h、
r/min离心10 min，取上清液，置于进样瓶中，待测。 －20 ℃冰箱中放置30 d、反复冻融（－20 ℃～室温）3次
2.4 方法学考察 后，按“2.3”项下方法预处理，再按“2.1”项下色谱与质谱
2.4.1 专属性考察 分别取空白血浆、空白血浆+吡咯 条件进样分析，记录峰面积，以实测质量浓度与理论质
替尼（质量浓度为 10 ng/mL）、患者血浆样品，按“2.3”项 量浓度进行比较，用RE考察样品在室温下放置、低温下
下方法预处理（空白血浆不加内标）后，再按“2.1”项下色 长期储存和反复冻融条件下的稳定性。另取 10、50、
谱与质谱条件进样分析，记录色谱图。结果显示，吡咯 200 ng/mL的质控样品溶液，按“2.3”项下方法预处理后，
替尼和内标的保留时间分别约为3.7、3.5 min，空白血浆 于4 ℃自动进样器中放置12 h，再按“2.1”项下色谱与质
中的磷脂、氨基酸等小分子内源性物质对吡咯替尼及内 谱条件进样分析，记录峰面积，以实测质量浓度与理论
标的测定无干扰，表明该方法专属性良好。结果见图2。 质量浓度进行比较，用RE考察经预处理后样品在待测过
2.4.2 线性关系考察 取“2.2.2”项下系列标准曲线溶 程中的稳定性。每质量浓度各条件均平行 5 份操作，结
液，按“2.3”项下方法预处理后，再按“2.1”项下色谱与质 果见表2。由表2可知，各样品的RE为－1.92％～5.42％，
谱条件进样分析，记录峰面积。以待测物的质量浓度 表明其在上述各种条件下的稳定性良好。
（x，ng/mL）为横坐标、待测物与内标的峰面积之比（y）为 2.4.5 提取回收率与基质效应考察 按“2.2.2”项下方
纵坐标进行加权线性回归（权重为 1/x），得吡咯替尼的 法制备10、50、200 ng/mL的质控样品溶液，分别按“2.3”
2
－2
－3
回归方程为y＝6.9×10 x+1.9×10 （r＝0.999 3），表明吡 项下方法预处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样
咯替尼检测质量浓度的线性范围为5～300 ng/mL，定量 分析，记录峰面积 A。取“2.2.1”项下对照品溶液，用
下限为5 ng/mL。 75％甲醇稀释，制成质量浓度分别为 10、50、200 ng/mL
2.4.3 精密度与准确度试验 取“2.2.2”项下质量浓度 的对照工作溶液，按“2.3”项下方法预处理后，再按“2.1”
为 5 ng/mL（即定量下限）的标准曲线溶液和 10、50、200 项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积 B。取空白
ng/mL 的质控样品溶液各 5 份，于 1 d 内按“2.3”项下方 血浆，按“2.3”项下方法预处理后，于60 ℃下以氮气流吹
法预处理，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，考 干，得空白基质，用上述10、50、200 ng/mL的对照工作溶
察日内精密度；连续 3 d 按“2.3”项下方法预处理，再按 液复溶，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，记录
“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，考察日间精密度。 峰面积 C。提取回收率＝A/C×100％，基质效应＝C/B×
以实测质量浓度与理论质量浓度进行比较，用相对误差 100％。每质量浓度平行5份操作。结果显示，吡咯替尼
（RE）考察准确度。结果显示，各样品的日内、日间RSD 的平均提取回收率为93.52％～95.93％（RSD≤4.42％），
m/z 583.4→138.3 m/z 583.4→138.3 m/z 583.4→138.3
100 100 3.74 100 3.73

50 50 50 1
1

cps 0 cps 0 cps 0
intensity， 100 0 3 m/z 494.5→393.4 6 intensity， 100 0 3 3.53 m/z 494.5→393.4 6 intensity， 100 0 3 3.53 m/z 494.5→393.4 6

50 50 50
2
2

0 0 0
0 3 6 0 3 6 0 3 6
t，min t，min t，min
A.空白血浆 B.空白血浆+吡咯替尼+内标 C.患者血浆
注：1.吡咯替尼；2. 内标
Note：1. pyrrotinib；2. internal standard
图2 人血浆中吡咯替尼定量分析专属性试验的典型MRM图
Fig 2 Typical MRM chromatograms of specificity tests of quantitative analysis for pyrrotinib in human plasma

中国药房 2021年第32卷第22期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22 ·2769 ·