Page 67 - 《中国药房》2021年20期
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MCF-7（P＞0.05）. 0.5-10 μg/mL DTX-PELGE-NPs could significantly inhibit the growth of human breast cancer cells MCF-7，
        and its inhibitory effect（except for DTX-PELGE-NPs 10 μg/mL group）was significantly stronger than that of DTX injection（P＜
        0.05）. CONCLUSIONS：The optimized formulation is stable and feasible. The obtained DTX-PELGE-NPs not only have uniform
        particle size，high encapsulation rate obvious slow-release effect，but also have stronger anti-tumor effect in vitro than DTX
        injection.
        KEYWORDS    Docetaxel； mPEG-PLGA-mPEG； Box-Behnken design-response surface methodology； HPLC； Formulation
        optimization


            多西他赛（docetaxel，DTX）为紫杉烷类微管抑制型                  的四元溶剂混合系统、多功能泵、InfinityLab Benchtop液
        抗肿瘤药物，主要作用于处在有丝分裂阶段的肿瘤细                            相色谱系统（美国Agilent公司），Nano ZS90 型激光粒度
          [1]
        胞 。DTX所具有的抗肿瘤作用使其成为激素难治性前                          分析仪（英国 Malvern 公司），H-600 型透射电镜（日本
                                                     [2]
        列腺癌、乳腺癌和非小细胞肺癌等的一线治疗药物 。                           Hitachi 公司），UPH-Ⅱ-10T 型优普超纯水仪（成都超
        但 DTX 水溶性较差，其注射剂中常添加吐温-80 和乙醇                      纯科技有限公司），Nanosep 超滤管（截留分子量为
                                                                                     ®
        作为增溶剂，而增溶剂易导致患者发生严重过敏等不良                           300 000，美国 Pall Life Science 公司），透析袋（截留分子
        反应 。此外，吐温-80还会改变DTX的体内行为，导致                        量为8 000～12 000，美国Sigma公司）等。
            [3]
        DTX 呈非线性药动学特征，大大限制了该药的临床应                          1.2 主要药品与试剂
        用 。因此，有研究者尝试利用脂质体、胶束、纳米粒等                              DTX原料药（批号20180412，纯度＞99％）、DTX对
          [3]
        新型给药系统作为DTX的载体，以提高其靶向性、减轻                          照品（批号M0308AS，纯度＞99％）均购自大连美仑生物
        不良反应，并取得了一定成果，但这些纳米材料包载药                           技术有限公司；DTX 注射液（批号 190815AN，纯度＞
        物易导致其相关制剂具有毒性大、不稳定等缺点                    [4－5] 。   99％）购自江苏恒瑞医药有限股份公司；乙酸乙酯（批号
            聚 乳 酸 - 羟 基 乙 酸 共 聚 物 [poly（lactic-co-glycolic  20190809）、丙酮（批号 20180120）均购自天津市进丰化
        acid），PLGA]可在体内分解、吸收，具有良好的生物相容                     工有限公司；泊洛沙姆 188（批号 190323）购自德国
        性，但表面的疏水性易导致其纳米粒在血液中被识别                            BASF公司；吐温-80（批号20190112）购自成都科龙化工
        和清除，滞留时间较短 。而将聚乙二醇（polyethylene                    试剂厂；胎牛血清（批号20190722）购自上海复蒙基因生
                            [6]
        glycol，PEG）接枝于 PLGA 两端而合成的新型高分子降                   物科技有限公司；注射用青霉素钠（批号 190620，规格
        解材料[聚乙二醇-（聚乳酸-羟基乙酸）-聚乙二醇三嵌段                        0.48 g/支）购自华北制药股份有限公司；RPMI 1640培养
        共聚物（mPEG-PLGA-mPEG，PELGE）]不仅具有 PLGA                基（批 号 20190508）购 自 美 国 Hyclone 公 司 ；噻 唑 蓝
        的生物相容性，而且强亲水性的PEG外层能够有效地减                          （MTT）购自美国Sigma公司；乳酸（LA，批号20190124）、
        少巨噬细胞的识别与摄取，从而增加药物在血液中的循                           乙醇酸（GA，批号20190205）、PEG（批号20190130，相对
              [7]
        环时间 。PELGE避免了其他纳米载体毒性大、不稳定                         分子质量为550，纯度5％）均购自山东医疗器械研究所；
        等缺点，增加了药物的溶解度和稳定性，延长了药物的                           乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。
        循环时间，降低了不良反应的发生风险，是一种优良的                           1.3  细胞
        药物载体材料 。基于此，本研究以PELGE为DTX的载                            人乳腺癌细胞 MCF-7 购自中国科学院上海细胞生
                    [7]
        体材料，采用乳化溶剂挥发法制备紫杉醇-聚乙二醇-（聚                         物学研究所。
        乳 酸 - 羟 基 乙 酸）- 聚 乙 二 醇 三 嵌 段 共 聚 物 - 纳 米 粒        2 方法与结果
       （DTX-PELGE-NPs）；采用高效液相色谱（HPLC）法测定                   2.1 PELGE的合成与表征
        DTX 含量；以包封率为考察因素，采用 Box-Behnken 设                      根据本课题组前期实验结果并参考文献[8－9]，按
        计-响应面法对处方进行优化，同时对其药剂学性质及                           LA∶ GA 为 7 ∶ 3（摩尔比），采用开环共聚法制得 PELGE
        体外释放规律进行考察，并初步评价其体外抗肿瘤活                            （纯度＞99％）。
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        性，旨在为相关制剂用于体内抗肿瘤研究提供依据。                                通过IR光谱和 H-NMR对PELGE进行化学结构验
        1 材料                                               证。结果见图1。在图1A中，2 900～3 000 cm 处的吸
                                                                                                   －1
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        1.1 主要仪器                                           收峰为 C—H 的伸缩振动峰，1 760 cm 为酯基中 C＝O
            本研究所用主要仪器有Nicolet 20 SXB 型红外光谱                 的伸缩振动峰，1 090 cm        － 1  为 O—CH2 的伸缩振动峰；
       （IR）仪、Varioskan Flash 型荧光化学发光分析仪（美国                 PELGE呈现出PEG与PLGA的混合光谱特征，其不同之
        Thermo Fisher Scientific公司），Unity 500 MHz型核磁共      处为PELGE的光谱中未见PEG光谱中羟基拉伸导致的
        振（NMR）仪（美国Varian公司），1260型HPLC仪及配套                  3 400 cm 处的宽吸收带，表明 PEG 的游离羟基已与羰
                                                                   －1

        中国药房    2021年第32卷第20期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 20  ·2493 ·
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