Page 71 - 《中国药房》2021年20期

下简称“完全培养基”）制成悬液，计数后按 5×10 个/mL 3 讨论
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以 100 μL 接种于 96 孔板中，于 37 ℃、5％CO2条件下培 DTX 于 228 nm 波长处有最大吸收，但是因其注射
养 24 h（培养条件下同）。将细胞随机分为空白对照组 液中的辅料吐温-80 在此波长处也有吸收，若采用紫外
和给药组，空白对照组加入完全培养基 100 μL，给药组 光谱法测定 DTX 含量会有较大误差，故本研究利用
分别加入含 PELGE-NPs 0.1、0.5、1、5、10、20、50 μg/mL HPLC法的分离功能消除辅料的干扰，并选择228 nm作
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（以PELGE-NPs计，质量浓度设置参考前期实验结果 ） 为 DTX 含量的检测波长，具有较强的专属性 。同时，
或含 DTX、DTX-PELGE-NPs 0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10 本课题组在综合考虑峰位、柱效、峰对称性、杂质检出及
μg/mL（均以 DTX 计，根据 PELGE-NPs 组浓度结合最优 仪器管路清洗等多种因素后，最终确定以乙腈-水（60∶40，
处方比例换算而得）的完全培养基100 μL，每组设3个复 V/V）为流动相。
孔。培养 24 h 后，弃去上清液，加入 500 ng/mL MTT 溶 本课题组前期已制备出性质稳定且大小均一的
液50 μL；继续孵育4 h，弃去MTT溶液，用PBS清洗后加 PELGE-NPs，并且通过调节超声频率、时间和次数等条
[7]
入二甲基亚砜100 μL，采用酶标仪于570 nm波长处测定 件将粒径控制在理想范围（50～200 nm）内 。同时，前
各孔的光密度（OD）值。实验重复3次，按公式计算细胞 期预实验证实，超声条件是影响 DTX-PELGE-NPs 粒度
和 PDI 的 关 键 因 素 ，而 粒 度 和 PDI 不 受 DTX 用 量 、
存活率：细胞存活率（％）＝ODn/OD0×100％。式中，ODn
为给药组细胞的 OD 值，OD0为空白对照组细胞的 OD PELGE用量和泊洛沙姆188浓度的影响，因此在考察最
值。采用 SPSS 19.0 软件对结果进行单因素方差分析， 优处方时未将粒度和 PDI 作为处方优化的指标。包封
检验水准α＝0.05。结果显示，PELGE-NPs 组细胞的存 率反映了药物被载体包载的程度，是纳米粒质量控制的
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活率较高，且其值与质量浓度无关，与空白对照组比较 一个重要指标 ，高包封率对提高纳米制剂疗效、降低
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差异均无统计学意义（P＞0.05），即 PELGE-NPs 对人乳 药物不良反应具有重要意义 ，故本研究以包封率为衡
腺癌细胞 MCF-7 的生长几乎无影响，表明 PELGE-NPs 量处方优化是否成功的标志。
作为载体的毒性较低、安全性较高。当DTX质量浓度＜ 本研究通过 Box-Behnken 设计-响应面法构建了
0.05 μg/mL 时，DTX 0.01 mg/mL 组和 DTX-PELGE-NPs DTX-PELGE-NPs 的参数模型，初步研究并探讨了各因
0.01 μg/mL组细胞的存活率均接近90％；随着DTX质量 素之间的相互作用。结果显示，随着DTX用量、PELGE
浓度的增加，DTX 和 DTX-PELGE-NPs 组细胞的存活 用量、泊洛沙姆188浓度的增加，包封率均呈先增后减的
率逐步降低，呈明显的浓度依赖趋势。当 DTX 质量浓 趋势。笔者分析其原因为当DTX和PELGE达到一定量
度≥0.05 μg/mL 时，DTX 和 DTX-PELGE-NPs 各浓度组 时，载体材料包载药物达到饱和，不再继续包载，导致未
细胞的存活率均较空白对照组显著降低（P＜0.05），且 被包载的游离药物逐渐增多，包封率下降；此外，在乳化
DTX-PELGE-NPs 各浓度组（除 10 μg/mL 组外）细胞的 溶剂挥发法中，初乳的稳定性是决定包封率的关键因
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存活率均显著低于同浓度DTX组（P＜0.05）。这表明将 素 ，而高浓度乳化剂会导致制剂的粒度偏小，影响初
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DTX 包载于 PELGE-NPs 中可增强 DTX 对人乳腺癌细 乳的稳定性，从而降低包封率 。因此，在达到最优乳
胞MCF-7的体外抑制作用。结果见表4。 化剂浓度后继续增加乳化剂用量，包封率会呈现下降
表4 各组人乳腺癌细胞MCF-7的存活率（x±±s，n＝3） 趋势。
Tab 4 Cell survival rates of human breast cancer cell 体外评价结果显示，DTX-PELGE-NPs呈类球形，大
MCF-7 in each group（x±±s，n＝3） 小均一且表面光滑。体外释放度考察结果显示，DTX-
PELGE-NPs 的释放率比 DTX 注射液慢，且曲线较为平
组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％
空白对照组 100 DTX 0.5 μg/mL组 62.7±2.9 ＊ 滑，展现出良好的缓释效果。这些特点是由 DTX-
PELGE-NPs 0.1 μg/mL组 96.6±3.2 ＊ DTX 1 μg/mL组 56.6±3.7 ＊ PELGE-NPs自身结构所决定的，包裹于内部的药物在纳
PELGE-NPs 0.5 μg/mL组 98.7±2.9 ＊ DTX 5 μg/mL组 48.5±4.2 ＊
PELGE-NPs 1 μg/mL组 95.9±4.9 ＊ DTX 10 μg/mL组 38.4±2.1 ＊ 米表面溶蚀后逐渐释放，其释放率较为稳定，药物突然
PELGE-NPs 5 μg/mL组 99.2±3.4 ＊ DTX-PELGE-NPs 0.01 μg/mL组 93.3±2.1 释放的可能性较低；同时，具有亲水性和柔性的PEG的空
PELGE-NPs 10 μg/mL组 94.8±4.1 ＊ DTX-PELGE-NPs 0.05 μg/mL组 81.3±2.4 ＊# 间位阻作用可阻止纳米粒之间的摩擦和碰撞，以减少纳
PELGE-NPs 20 μg/mL组 98.6±3.6 ＊ DTX-PELGE-NPs 0.1 μg/mL组 70.1±5.4 ＊#
PELGE-NPs 50 μg/mL组 95.3±4.2 ＊ DTX-PELGE-NPs 0.5 μg/mL组 49.6±2.7 ＊# 米粒聚集所造成的结构破坏，从而达到缓释的效果 [16－17] 。
DTX 0.01 μg/mL组 92.3±3.7 DTX-PELGE-NPs 1 μg/mL组 43.2±0.3 ＊# 在0.05～5 μg/mL范围内，DTX-PELGE-NPs的细胞
DTX 0.05 μg/mL组 88.2±4.1 ＊ DTX-PELGE-NPs 5 μg/mL组 39.8±3.3 ＊#
DTX 0.1 μg/mL组 75.6±5.5 ＊ DTX-PELGE-NPs 10 μg/mL组 33.5±2.9 ＊ 毒性显著强于游离的 DTX。其主要原因为纳米粒能够
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注：与空白对照组比较，P＜0.05；与 DTX组比较，P＜0.05 通过肿瘤细胞的内吞作用而促进药物被摄取，尺寸较小
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Note：vs. blank control group， P＜0.05；vs. DTX group，P＜0.05 且 PEG 成分含量较高的纳米粒进入肿瘤细胞的能力更
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中国药房 2021年第32卷第20期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 20 ·2497 ·