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丸，故为完善那如-3 味提取工艺，同时为满足后期相关                         2 方法与结果
        缓控释剂型改进的需要，本研究拟对那如-3味的醇提工                          2.1 那如-3味的制备
        艺进行优化，为成型工艺奠定基础。                                       分别称取制草乌、荜茇、诃子饮片150、90、300 g，粉
            超高效液相色谱-电喷雾质谱技术（UPLC-ESI-MS）                   碎，混匀，过60目筛，即得那如-3味。
        无需将各成分分离，仅通过提取成分离子对即可准确定                           2.2  那如-3 味中苯甲酰乌头原碱等 8 种成分的含量
        量，极大地缩短了分析时间且具有较好的选择性 。多                           测定
                                                  [13]
        反应监测模式（MRM）可进一步提高检测灵敏度，且各                          2.2.1  色谱与质谱条件         色谱条件如下：以 Shim-pack
        成分目标峰均在不同通道内独立显示，降低了各待测成                           GIST-HP C18 （2.1 mm×100 mm，3 μm）为色谱柱，以甲醇
        分难以分离所致的不良影响，在中药复杂成分的定量分                           （A）-0.1％甲酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～0.3
                         [14]
        析中得以广泛应用 。正交实验通过正交设计表来安                            min，5％ A；0.3～2 min，5％ A→50％ A；2～4 min，
        排和分析实验过程所涉及的各个因素，从各因素的所有                           50％A→55％A；4～6 min，55％A→100％A；6～7 min，
        水平中挑选具有代表性的水平进行实验，并结合综合评                           100％ A；7～7.01 min，100％ A→5％ A；7.01～10 min，
        价来找出最优的水平组合，现已被广泛应用于各科研领                           5％A）；流速为0.25 mL/min；柱温为35 ℃；进样量为3 μL。
          [15]
        域 。基于此，本研究采用UPLC-ESI-MS法同时测定那                      质谱条件如下：以 ESI 为离子源，采用 MRM 方式进行
        如-3 味中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰                         正、负离子扫描；雾化气流量为 3 L/min；加热气流量为
        次乌头原碱、乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、胡椒碱和没                          10 L/min；接口温度为 300 ℃；脱溶剂温度为 526 ℃；加
        食子酸的含量；同时，以这8种成分含量为指标，以料液                          热块温度为400 ℃。8种待测成分的质谱参数见表1（表
        比、乙醇体积分数、提取时间为考察因素                 [16－17] ，采用正交   中，Q1表示前四极杆的预杆电压，Q3表示后四极杆的预
        实验优化那如-3味的醇提工艺，旨在为其质量控制和相                          杆电压），二级质谱图见图1。
        关制剂开发提供参考。                                            表 1 苯甲酰乌头原碱等8种成分的质谱分析参数
        1 材料                                               Tab 1 Mass spectrometry analysis parameters of 8
        1.1  主要仪器                                                  components as benzoylaconitine
            本研究所用主要仪器有 LC-MS8045 型三重四极杆                     待测成分       定量离子对（正/负离子） Q1能量偏差，eV  碰撞能量，eV Q3能量偏差，eV
        UPLC-ESI-MS 联用系统及配备的 LC-20AD 型输液泵、                  苯甲酰乌头原碱    m/z 604.0→105.0（+）  －28  －55   －21
                                                            苯甲酰新乌头原碱   m/z 590.0→105.0（+）  －20  －55   －17
        DGU-20A5R 型在线脱气机、SIL-20AC 型自动进样器、                   苯甲酰次乌头原碱   m/z 574.0→105.1（+）  －20  －55   －30
        CTO-20A 型 柱 温 箱 、CBM-20A 型 系 统 控 制 器 、              乌头碱        m/z 646.3→586.1（+）  －30  －37   －38
        FCV-20AH2型阀切换系统，AP135W型十万分之一电子                      新乌头碱       m/z 632.3→572.1（+）  －30  －37   －38
                                                            次乌头碱       m/z 616.0→556.1（+）  －28  －35   －30
        天平（日本Shimadzu公司）；KH-500DV型数控超声波清
                                                            胡椒碱        m/z 286.0→115.0（+）  －20  －40   －20
        洗器（昆山禾创超声有限公司）；2TB-A型磁力加热搅拌                         没食子酸       m/z 169.0→125.0（－）  18  17      21
        电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）等。                              2.2.2  混合对照品溶液的制备            精密称取苯甲酰乌头
        1.2  药品与试剂                                         原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头碱、
            苯 甲 酰 乌 头 原 碱（批 号 111794-201705，纯 度 ≥          新乌头碱、次乌头碱、胡椒碱、没食子酸对照品各适量，
        98.7％）、苯甲酰新乌头原碱（批号 111795-201804，纯                 分别置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成上述8种成分
        度≥96.7％）、苯甲酰次乌头原碱（批号 111796-201705，                质量浓度分别为 228、212、200、200、212、160、368、340
        纯度≥98.6％）、乌头碱（批号 110720-201708，纯度≥                 μg/mL的单一对照品贮备液；分别精密量取上述各单一
        94.7％）、新乌头碱（批号110799-201807，纯度≥98.3％）、             对照品贮备液适量，置于同一 5 mL 量瓶中，加甲醇稀
        次乌头碱（批号 110798-201609，纯度≥99.2％）、胡椒碱                释，制成上述 8 种成分质量浓度分别为 0.456、0.424、
       （批号 110775-201705，纯度≥98.9％）、没食子酸（批号                 1.600、0.080、0.212、0.320、1.472、4.080 μg/mL 的混合对
        110831-201805，纯度≥98.8％）对照品均购自中国食品                  照品溶液。所有溶液均于4 ℃保存，备用。
        药品检定研究院；甲醇、乙腈均为色谱纯，甲酸、乙酸铵                          2.2.3  供试品溶液的制备          称取“2.1”项下那如-3 味约
        均为分析纯，水为超纯水。                                       9.0 g，置于圆底烧瓶中，加 85％乙醇 90 mL，称定质量，
            制草乌（批号20210111）、荜茇（批号20210111）、诃子              用磁力加热搅拌电热套加热提取 1.0 h，冷却至室温，再
       （批号20210111）饮片均购自北京同仁堂（亳州）饮片有限                      次称定质量，用 85％乙醇补足减失的质量，混匀。取上
        责任公司，经内蒙古医科大学药学院渠弼教授鉴定，分别                          述提取液 10 μL，加入甲醇-水溶液（1 ∶ 1，V/V，下同）990
        为毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb.干燥块           μL，涡旋混匀30 s；取上述混合溶液100 μL，加入甲醇-水
        根的炮制品，胡椒科植物荜茇Piper longum L.的干燥近成                  溶液900 μL，经0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。
        熟或成熟果穗，使君子科植物绒毛诃子Terminalia chebu-                 2.2.4  专属性考察       取上述空白溶液（甲醇-水溶液）、
        la Retz.var tomemtella Kurt.的干燥成熟果实。               混合对照品溶液、供试品溶液适量，按“2.2.1”项下试验


        中国药房    2021年第32卷第16期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 16  ·1989 ·
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