Page 79 - 《中国药房》2021年16期

表 3 苯甲酰乌头原碱等8 种成分的加样回收率试验结 表4 那如-3味醇提工艺的因素与水平
果（n＝6） Tab 4 Factors and levels of Naru-3 ethanol extraction
Tab 3 Results of recovery tests of 8 components as technology
benzoylaconitine（n＝6） 水平 A，g/mL B，％ C，h
1 1∶6 65 0.5
已知量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回收率， RSD，
待测成分 2 1∶8 75 1.0
mg mg mg ％ ％ ％
苯甲酰乌头原碱 2.41 2.25 4.86 108.89 104.07 4.42 3 1∶10 85 1.5
2.37 2.25 4.65 101.33 3 讨论
2.34 2.25 4.79 108.89
2.33 2.25 4.51 96.89 本课题组参考文献[18]，在采用等度洗脱时发现，制
2.37 2.25 4.71 104.00 草乌中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次
2.43 2.25 4.78 104.44 乌头原碱、乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等6种成分色谱
苯甲酰新乌头原碱 1.71 1.62 3.29 97.53 98.87 2.21 峰的峰形较好，但未能分离出胡椒碱和没食子酸，故采
1.61 1.62 3.21 98.77
1.74 1.62 3.29 95.68 用梯度洗脱。结果，8 种成分色谱峰的峰形均较好。同
1.65 1.62 3.30 101.85 时，本课题组又对不同流动相体系（乙腈-0.1％甲酸溶
1.54 1.62 3.14 98.77 液、乙腈-5 mmol/L 乙酸铵溶液、甲醇-5 mmol/L 乙酸铵
1.63 1.62 3.26 100.62
苯甲酰次乌头原碱 18.93 18.83 37.68 99.58 98.79 1.13 溶液、乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.1％甲酸溶液）进行了考
17.74 18.83 36.65 100.42 察，结果发现，当以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相时，胡
19.64 18.83 38.17 98.41 椒碱、没食子酸的分离度和色谱峰峰形均较差；当以乙
17.82 18.83 36.42 98.78 腈-5 mmol/L乙酸铵溶液、甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液为
16.56 18.83 35.08 98.35
17.46 18.83 35.76 97.19 流动相时，胡椒碱、没食子酸的色谱峰峰形较差，且与乙
乌头碱 0.04 0.04 0.08 100.00 104.17 9.80 腈-0.1％甲酸溶液比较，苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头
0.04 0.04 0.08 100.00 原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头碱、新乌头碱、次乌头碱
0.04 0.04 0.09 125.00 的响应值均有所减弱且灵敏度较差；当以乙腈-水、甲醇-
0.04 0.04 0.08 100.00
0.03 0.04 0.07 100.00 水为流动相时，8种成分的响应值均较强，但色谱峰存在
0.03 0.04 0.07 100.00 拖尾现象；当以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相时，各成分
新乌头碱 0.10 0.11 0.22 109.09 102.24 7.27 的色谱峰峰形对称且灵敏度较高，故选择甲醇-0.1％甲
0.09 0.11 0.19 90.91
0.09 0.11 0.21 109.09 酸溶液为流动相进行梯度洗脱。
0.09 0.11 0.20 100.00 本课题组前期通过质谱扫描来确定了那如-3中8种
0.08 0.11 0.20 109.09 成分的正、负离子检测模式。结果发现，苯甲酰乌头原
0.08 0.11 0.20 109.09 碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头碱、新
次乌头碱 0.23 0.21 0.43 95.24 99.54 6.86
0.20 0.21 0.42 104.76 乌头碱、次乌头碱、胡椒碱等7种成分，在正离子模式下
+
0.20 0.21 0.41 100.00 可得到1个质子，形成[M+H] 准分子离子峰，故上述7种
0.25 0.21 0.44 90.48 成分采用 MRM 正离子模式；而没食子酸在负离子模式
0.22 0.21 0.42 95.24
0.21 0.21 0.44 109.52 下的响应值较强，故该成分采用 MRM 负离子模式。确
胡椒碱 17.93 18.52 35.94 97.25 100.87 3.07 定正、负离子检测模式后，本课题组分别在不同碰撞能
19.14 18.52 37.46 98.92 量（65、55、45、35、25、15 eV）条件下对母离子进行扫描，
18.59 18.52 37.65 102.92 选择响应值较强的两对碎片离子作为定性离子对，响应
18.32 18.52 37.92 105.83
18.08 18.52 36.48 99.35 值最强的离子对作为定量离子对，通过电压优化确定最
18.26 18.52 36.95 100.92 终碰撞能量，获得“2.2.1”项下质谱条件。
没食子酸 25.75 23.51 49.02 98.98 99.22 2.29 2020年版《中国药典》（一部）中规定，制草乌中双酯
23.48 23.51 47.12 100.55
22.03 23.51 44.45 95.36 型生物碱以乌头碱、次乌头碱、新乌头碱总量计不得超
24.12 23.51 47.98 101.49 过0.04％，荜茇中胡椒碱不得低于2.50％，而未对诃子中
23.07 23.51 46.13 98.09 没食子酸含量作出规定 。在本研究中，测得制草乌中
[11]
23.80 23.51 47.51 100.85
乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的平均总含量为 0.041％
饮片，粉碎，过60目筛，称取约180.0 g，共3份，按上述最 （0.41 mg/g），荜 茇 中 胡 椒 碱 的 平 均 含 量 为 2.601％
优提取工艺进行 3 次验证实验。结果，8 种成分的平均 （26.01 mg/g），诃子中没食子酸的平均含量为 1.733％
含 量 分 别 为 1.69、1.48、14.69、0.05、0.08、0.28、26.01、 （17.33 mg/g）。由于本研究所用的提取条件和测定方法
17.33 mg/g（RSD 为 0～4.96％，n＝3）；平均综合评分为 与《中国药典》不同，故制草乌中双酯型生物碱总量与药
19.03分（RSD＝1.42％，n＝3），详见表6。 典有出入。

中国药房 2021年第32卷第16期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 16 ·1993 ·