Page 70 - 《中国药房》2021年16期
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14％ A；31～44 min，14％ A→33％ A；44～47 min，              2.3.3  重复性试验      取同一编号和肤止痒方样品（编号
        33％A→42％A；47～55 min，42％A→50％A）；流速为                  S1）适量，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，
        0.25 mL/min；柱温为 30 ℃；检测波长为 236 nm；进样量               再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以落新
        为5 μL。                                              妇苷峰为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰
        2.2 溶液的制备                                           面积。结果，各共有峰相对保留时间的 RSD 均不大于
        2.2.1  混合对照品溶液         分别取没食子酸、阿魏酸、落                0.45％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均不大于 2.87％（n＝
        新妇苷、丹皮酚、白鲜碱、黄柏酮、梣酮、蛇床子素对照品                          6），表明方法重复性良好。
        适量，精密称定，加入甲醇溶解并稀释，混匀，制成质量                           2.3.4  指纹图谱的建立与色谱峰的指认                取 10 批和肤
        浓 度 分 别 为 0.512、0.536、0.516、0.536、0.560、0.577、      止痒方供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记
        0.542、0.725 mg/mL 的单一对照品贮备液。精密吸取上                   录色谱图。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
        述单一对照品贮备液各适量，以甲醇稀释制成每 1 mL                         （2012 版）》进行图谱数据分析，以 S1 为参照图谱，将时
        含没食子酸40 μg、阿魏酸 10 μg、落新妇苷 360 μg、丹皮                 间窗宽度设定为0.1 min，采用多点校正和全谱峰匹配生
        酚 15 μg、白鲜碱 6 μg、黄柏酮 3 μg、梣酮 35 μg、蛇床子              成叠加指纹图谱，采用中位数法生成对照指纹图谱
        素 80 μg 等 8 种成分的混合对照品溶液；同法配制每 1                    （R）。结果，10 批样品的指纹图谱中共标定共有峰 34
        mL含白鲜碱6 μg、黄柏酮3 μg、梣酮35 μg等3种成分的                    个，详见图 1。通过与含 8 种成分的混合对照品溶液的
        混合对照品溶液和单一对照品溶液。                                    色谱图（同法测定，见图2）进行比对，指认峰1为没食子
        2.2.2  供试品溶液       按处方比例分别取徐长卿、白鲜                   酸、峰10为阿魏酸、峰13为落新妇苷、峰23为丹皮酚、峰
        皮、蛇床子、土茯苓、当归、石榴皮的单味饮片粉末（过三                          28为白鲜碱、峰31为黄柏酮、峰32为梣酮、峰34为蛇床
        号筛，下同），精密称定，置于圆底烧瓶中，加入10倍量水                         子素。
        （mL/g）浸泡30 min，加热回流提取（以武火煮沸，后用文                       1.80
        火微沸 1 h），趁热过滤，剩余药渣以同法煎煮后趁热过                           1.50
        滤，合并两次滤液并浓缩，用水定容至 50 mL，即得和肤                          1.20
        止痒方样品。同法制备单味药材样品和分别缺徐长                               AU  0.90
                                                              0.60
        卿、白鲜皮、蛇床子、土茯苓、当归、石榴皮的阴性样品。
                                                              0.30
        取上述样品溶液 200 μL，加入甲醇 800 μL，混匀，于4 ℃
                                                                0
        下以14 000×g离心15 min，取上清液，于40 ℃水浴下以
                                                                 0  5   10  15  20  25  30  35  40  45  50  55
        氮气流吹干，残渣加入流动相（乙腈与0.1％冰醋酸溶液                                                  t，min
                                                            图1   10批和肤止痒方的UPLC叠加指纹图谱和对照指
        体积比为 1 ∶ 9，下同）1 000 μL 复溶，混匀，经 0.22 μm 微
                                                                 纹图谱
        孔滤膜过滤，即得单味药材样品溶液、阴性样品溶液、和
                                                            Fig 1 UPLC superimposed fingerprints and control
        肤止痒方供试品溶液。
                                                                   fingerprint of 10 batches of HFZYF
        2.3  和肤止痒方指纹图谱的建立
        2.3.1  精密度试验       取和肤止痒方供试品溶液（编号                     0.72
        S1），按“2.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰面积。                       0.60
                                                              0.48
        以落新妇苷峰（对应色谱峰保留时间适中且峰面积相对
                                                             AU  0.36
        较大）为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰
                                                              0.24
        面积。结果，各共有峰相对保留时间的 RSD 均不大于
                                                              0.12
        0.19％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均不大于 2.75％（n＝
                                                               0
        6），表明方法精密度良好。
                                                                0   5   10  15  20  25  30  35  40  45  50  55
        2.3.2  稳定性试验       取和肤止痒方供试品溶液（编号                                            t，min
        S1），分别于室温下放置 0、1、2、4、8、12、24 h 时按“2.1”                 注：1.没食子酸；10.阿魏酸；13.落新妇苷；23.丹皮酚；28.白鲜碱；
                                                            31.黄柏酮；32.梣酮；34. 蛇床子素
        项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以落新妇苷峰为
                                                               Note：1. gallic acid；10. ferulic acid；13. astilbin；23. paeonol；28.
        参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结                            dictamnine；31. obacunone；32. fraxinellone；34. osthole
        果，各共有峰相对保留时间的RSD均不大于0.19％（n＝                        图2 没食子酸等8种成分混合对照品溶液的UPLC图
        7），相对峰面积的 RSD 均不大于 2.98％（n＝7），表明供                   Fig 2 UPLC chromatogram of mixed control of 8
        试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。                                      components as gallic acid


        ·1984 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 16                                 中国药房    2021年第32卷第16期
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