Page 78 - 《中国药房》2021年12期

CCK-8 assay was used to detect the effects of different concentration of polysaccharide（6.25-100 μg/mL）before and after isolation
on the proliferation rate of mice macrophage RAW264.7. Griess method and ELISA assay were adopted to detect the effects of low，
medium and high concentration of polysaccharide（12.5，25，50 μg/mL）on the release of NO，IL-6 and TNF-α in LPS-induced
RAW264.7 cells. RESULTS：In the optimal decolorization process of AB-8 macroporous adsorption resin，the adsorption flow rate
was 1.2 BV/h，the decolorization time was 9 h，and sample concentration was 25 mg/mL. The comprehensive scores of 3 times of
verification tests were 63.43％ ，63.29％ and 63.34％ ，respectively，with an average of 63.35％ （RSD＝0.11％ ，n＝3）. One
neutral polysaccharide（CTZ）and 5 acid polysaccharides（CT1，CT2，CT3，CT4，CT5）were isolated from the polysaccharide of
C. cistanche，the contents were 299.2，168.0，123.2，121.6，54.4，11.2 mg/g. Compared with control group，6.25-100 μg/mL CTZ
（except for 6.25 μ g/mL），CT2，CT4，CT5 and 6.25 μ g/mL CTC （the polysaccharide before seperation） could significantly
increase the proliferation rate of RAW264.7 cells（P＜0.05），while 6.25-100 μg/mL CT1，CT3 and 50 μg/mL CTC could decrease
te proliferation rate of RAW264.7 cells（P＜0.05）. Compared with LPS group，the release of NO were decreased significantly in
low，medium and high concentration groups of CTC，CT2，CT3 and CT5，CTZ low concentration group（P＜0.05），while were
increased significantly in high concentration groups of CT1 and CT4 （P＜0.05）. The release of IL-6 （except for CT1 high
concentration group and CT5 low concentration group）and TNF-α（except for CT1 medium concentration group）were decreased
significantly in low，medium and high concentration groups（P＜0.05）. CONCLUSIONS：The optimized decolorization technology
of macroporous adsorption resin is stable and feasible in the study. One neutral polysaccharide and 5 acidic polysaccharides can be
isolated from water extract of C. tubulosa polysaccharides，among which CT2 polysaccharide has stronger anti-inflammatory ability.
KEYWORDS Cistanche tubulosa polysaccharide；Decolorization；Separation；Immunocompetence

管花肉苁蓉为列当科管花肉苁蓉 Cistanche tubulo- 多糖（LPS）可激活巨噬细胞的炎症信号通路，诱导一氧
sa（Schenk）Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。现代研究表 化氮（NO）和诸如白细胞介素 6（IL-6）、肿瘤坏死因子α
明，管花肉苁蓉含有苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素 （TNF-α）等促炎细胞因子诱导的合成及释放，从而引发
[12]
类、多糖类、生物碱类等多种生物活性物质，具有壮阳、 机体一系列的炎症反应 。本研究拟建立 LPS 诱导的
通便、保肝、抗衰老、抗疲劳、增强免疫力及益智等功 小鼠 RAW264.7 巨噬细胞炎症模型，从管花肉苁蓉多糖
效 [1－4] ，可用于临床治疗肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、 对巨噬细胞增殖、炎症因子分泌和 NO 产生等方面的影
[5]
腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等症 。 响入手，初步评价其对机体免疫活性的影响，旨在为深
管花肉苁蓉多糖水提物呈棕黄色，本课题组前期实 入研究管花肉苁蓉多糖抗炎活性物质基础以及开发其
验发现，该水提物中除含管花肉苁蓉多糖外，还包含水 多糖资源提供理论依据。
溶性色素、蛋白质等非目标成分，这给多糖的分离纯化、 1 材料
生物活性研究等造成了很大的困难。传统的有机溶剂 1.1 主要仪器
脱色处理会破坏粗提物中目标成分的化学结构，降低后 本研究所用主要仪器包括 UV-2550 型紫外-可见分
者的药理活性，并引入对人体有害的成分 。大孔吸附 光光度计（日本Shimadzu公司）、Multiskan Go型全波长
[6]
树脂是中药提取物中多糖脱色的常用材料，是一种性价 酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、Herocell
比较高的高分子吸附材料，其物理、化学性质稳定，利用 180 型 CO2 培养箱（上海润度生物科技有限公司）、
其对色素成分的选择吸附和筛分性能，可针对性地去除 AB135-S 型 分 析 天 平（瑞 士 Mettler Toledo 公 司）、
中药提取物中的色素，加之其可通过酸洗碱洗的方式进 OSB-2100EYELA 型油浴锅（上海爱郎仪器有限公司）、
行再生，因而得以广泛应用 。本研究拟利用大孔吸附 N-1001EYELA 型旋转蒸发仪（上海爱郎仪器有限公
[7]
树脂对管花肉苁蓉多糖水提物进行脱色处理，并采用正 司）、THZ-100 型恒温摇床（上海一恒仪器有限公司）、
交实验对脱色条件进行优化；提取物经脱色处理后，依 3-18K型离心机（德国Sartorius AG公司）、IX71-12FL/PH
据多糖所携带基团性质的不同，拟用离子交换柱层析的 型荧光倒置显微镜（日本Olympus公司）等。
方法，进一步分离管花肉苁蓉多糖中的中性、酸性多糖 1.2 主要药品与试剂
组分。 管花肉苁蓉多糖水提物（批号 20180201，每克多糖
已有研究表明，植物多糖具有免疫调节作用，是天 相当于17.36 g管花肉苁蓉）由新疆和田帝辰医药生物科
然的免疫调节剂，可以激活补体系统和 T/B 淋巴细胞、 技有限公司惠赠，样品于密封、阴凉、干燥处存放；蒽酮
巨噬细胞、自然杀伤（NK）细胞等免疫细胞，同时亦可促 （批号20190120）购自上海科丰实业有限责任公司；无水
进多种细胞因子的释放，并促进抗体的生成等 [8－11] 。脂 葡萄糖（分析纯，批号：20181115）购自天津市科密欧化

·1480 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 12 中国药房 2021年第32卷第12期