Page 83 - 《中国药房》2021年12期

人 参 二 醇 对 APP-SH-SY5Y 细 胞 中 Tau 蛋 白 磷 酸 化 及 Fyn/

GluN2B信号通路的影响 Δ

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梁喜才 ，蔺 莹 ，肖洪贺 ，孔 亮 ，杨静娴 （1.辽宁中医药大学实验动物中心，沈阳 110847；2.辽宁中医药
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大学药学院，辽宁 大连 116600）
中图分类号 R966 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）12-1485-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.12.13
摘 要 目的：研究人参二醇（PD）对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y（APP-SH-SY5Y）中Tau蛋白磷酸化的影响及
其作用机制。方法：采用分子对接技术验证 PD 与非受体酪氨酸激酶 Fyn 的靶向性。在体外培养 SH-SY5Y 细胞，构建
APP-SH-SY5Y细胞模型和绿色荧光蛋白（GFP）-SH-SY5Y细胞模型（对照细胞），通过检测细胞中β淀粉样蛋白（Aβ1-42 ）的表达来验
证 APP-SH-SY5Y 细胞模型是否构建成功。以 GFP-SH-SY5Y 细胞为对照，采用 CCK-8 法检测 5、10、20、30、40 μmol/L 的 PD 和
125、250、500、1 000、2 000 nmol/L的PP2（Fyn抑制剂，阳性对照）作用24 h对APP-SH-SY5Y细胞存活率的影响，以确定最佳给药
浓度。以APP-SH-SY5Y细胞为对象，分别检测最佳浓度PD、PP2作用24后细胞中Ca 浓度及磷酸化Tau蛋白（p-Tau）/Tau、磷酸化
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非受体酪氨酸激酶Src（p-Src）/Fyn、磷酸化谷氨酸受体2B（p-GluN2B）/GluN2B比值。结果：分子模拟对接结果显示，PD可靶向结
合Fyn蛋白。与GFP-SH-SY5Y细胞比较，APP-SH-SY5Y细胞中Aβ 1-42蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）。PD和PP2的最佳作用
浓度分别为20 μmol/L和500 nmol/L。20 μmol/L PD、500 nmol/L PP2均可显著升高细胞的存活率，显著降低细胞中Ca 浓度以及
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p-Tau/Tau、p-Src/Fyn、p-GluN2B/GluN2B比值。结论：PD可通过抑制Fyn/GluN2B信号通路来降低APP-SH-SY5Y细胞中Ca 浓度
及Tau蛋白的磷酸化水平。
关键词 人参二醇；转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y；Tau蛋白；磷酸化；非受体酪氨酸激酶Fyn/谷氨酸受体2B信
号通路

Effects of Panaxadiol on Tau Protein Phosphorylation and Fyn/GluN2B Signaling Pathway in APP-SH-
SY5Y Cells
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LIANG Xicai ，LIN Ying ，XIAO Honghe ，KONG Liang ，YANG Jingxian （1. Laboratory Animal Center，
Liaoning University of TCM，Shenyang 110847，China；2. College of Pharmacy，Liaoning University of TCM，
Liaoning Dalian 116600）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effects and mechanism of panaxadiol（PD） on Tau protein phosphorylation in the
SH-SY5Y cells transfected with APP gene（APP-SH-SY5Y）. METHODS：The target of PD and non-receptor tyrosine kinases Fyn
was verified by molecular docking. SH-SY5Y cells were cultured in vitro，and the APP-SH-SY5Y cell models and green fluorescent
（GFP）-SH-SY5Y cell model（control cell）was constructed. The expression of Aβ 1-42 was detected so as to verify the success of
APP-SH-SY5Y cell model. Taking GFP-SH-SY5Y cells as control，the effects of 5，10，20，30，40 μmol/L PD and 125，250，
500，1 000，2 000 nmol/L PP2（Fyn inhibitor，positive control）on the survival rate of APP-SH-SY5Y cells were detected by
CCK-8 assay after treated for 24 h， so as to confirm the optimal concentration. The concentration of Ca 2 + ， the ratio
fophosphorylated Tau protein（p-Tau）/Tau，phosphorylatedn Src（p-Src）/Fyn and phosphorylated glutamate receptor2B（p-GluN2B）/
GluN2B were detected in APP-SH-SY5Y cells after trated with the optimal concentration of PD and PP2 for 24 h. RESULTS：The
results of molecular simulation docking showed that PD could target Fyn protein. Compared with GFP-SH-SY5Y cells，the protein
expression of Aβ 1-42 in APP-SH-SY5Y cell were increased significantly（P＜0.01）. The optimal concentration of PD and PP2 were
20 μmol/L and 500 nmol/L. The 20 μmol/L PD and 500 nmol/L PP2 could increase the survival rate of the cells and reduced the
concentration of Ca ，the ratio of p-Tau/Tau，p-Src/Fyn，and p-GluN2B/GluN2B. CONCLUSIONS：PD can reduce the the
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phosphorylation of Tau protein through inhibiting Fyn/GluN2B signaling pathway.
KEYWORDS Panaxadiol；APP-SH-SY5Y cells；Tau protein；Phosphorylation；Fyn/GluN2B signaling pathway

Δ 基金项目：辽宁省教育厅科学技术研究项目（No.L202036） 阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种进
＊助理实验师，硕士。研究方向：神经药理学。电话：024-
行性的神经退行性疾病，患者通常会出现以记忆力衰
31207049。E-mail：1083773791@qq.com
退、学习能力减弱为主的症状，并伴有情绪调节障碍以
# 通信作者：教授，博士生导师，博士。研究方向：神经药理学。
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电话：0411-87586009。E-mail：jingxianyang63@126.com 及运动能力丧失 。目前主流观点认为，AD 的病因与

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