Page 102 - 《中国药房》2021年10期
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腔注射等体积生理盐水，连续7天。于皮下注射ISO 30                         p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 比值表示 JAK2、STAT3
        min后，普萘洛尔组小鼠灌胃相应药液，PNU282987各剂                      磷酸化水平。实验重复3次。
        量组小鼠腹腔注射相应药液，模型组小鼠腹腔注射等体                            2.7 统计学方法
        积生理盐水，给药体积均为 0.01 mL/g，每天 1 次，持续                        采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析。计量资
        7天。                                                 料均以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组
        2.2 小鼠心功能检测                                         间两两比较采用 LSD 检验。P＜0.05 为差异有统计学
            末次给药 12 h 后，经鼻饲异氟烷（诱导浓度 2％～                     意义。
        3％）麻醉各组小鼠，经心动超声仪检测各组小鼠的左室                           3 结果
        射血分数（EF）和左室短轴缩短率（FS），每组原始数据取                        3.1 PNU282987对心脏重塑模型小鼠心功能和HMI的
        连续4个心动周期的平均值作为结果。                                   影响
        2.3 小鼠全心质量指数检测                                          与正常对照组比较，模型组小鼠 EF、FS 均显著降
            心功能检测结束并待小鼠苏醒后，称定各组小鼠体                          低，HMI 显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）。与模型组比
        质量（BW）；腹腔注射10％水合氯醛溶液（0.01 mL/g）进                    较，PNU282987 中、高剂量组和普萘洛尔组小鼠 EF、FS
        行麻醉，于腹主动脉取血1 mL后，处死，迅速取出心脏，                         均显著升高，PNU282987 高剂量组和普萘洛尔组小鼠
        用磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）清洗残血，滤纸吸干后称                      HMI均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），而PNU282987低
                                                            剂量组上述指标均无明显变化（P＞0.05），详见表1。
        定质量记作全心质量（HM），计算全心质量指数（HMI）：
                                                            表 1 PNU282987 对心脏重塑模型小鼠心功能和 HMI
        HMI＝HW（mg）/BW（g）。
                                                                 的影响（x±±s，n＝10）
        2.4  小鼠心肌组织形态学观察
                                                            Tab 1 Effects of PNU282987 on cardiac function and
            取各组小鼠心脏近心尖处一半的心肌组织，用10％
                                                                   HMI in cardiac remodeling model mice（x±±s，
        甲醛溶液迅速固定 24 h 后，常规石蜡包埋，制成厚约 5
                                                                   n＝10）
        μm的切片，进行Masson染色后，使用生物显微镜观察其
                                                             组别               EF，％          FS，％     HMI，mg/g
        心肌组织形态学变化。
                                                             正常对照组          71.60±6.60    36.00±4.42  4.48±0.45
        2.5  小鼠血清指标检测                                        模型组            60.93±2.89 ＊＊  29.95±4.41 ＊  5.27±0.63 ＊＊
            取“2.3”项下各组小鼠腹主动脉血适量，以 3 500                      PNU282987低剂量组  66.43±6.78    33.28±3.25  5.14±0.35
                                                             PNU282987中剂量组  68.47±7.01 #  35.58±5.34 #  4.99±0.53
        r/min离心20 min后，分离血清，采用生化法以全自动酶                       PNU282987高剂量组  72.77±6.14 ##  38.18±7.37 ##  4.40±0.80 #
        标仪测定各组小鼠血清中LDH、CK含量，采用ELISA法                         普萘洛尔组          72.63±5.25 ##  37.85±5.80 ##  4.16±0.67 ##
                                                                               ＊
                                                                                                         #
        以 全 自 动 酶 标 仪 测 定 血 清 中 TNF-α 、IL-6 含 量 和              注：与正常对照组比较，P＜0.05， P＜0.01；与模型组比较，P＜
                                                                                      ＊＊
                                                                ##
        ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平，严格按照相应试剂盒                       0.05，P＜0.01
                                                               Note：vs. normal control group， P＜0.05， P＜0.01；vs. model
                                                                                             ＊ ＊
                                                                                     ＊
        说明书方法操作。
                                                            group，P＜0.05，P＜0.01
                                                                       ##
                                                                 #
        2.6  小鼠心脏组织中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3
                                                            3.2  PNU282987对心脏重塑模型小鼠心肌组织形态学
        蛋白表达检测
                                                            的影响
            采用 Western blot 法进行检测。称取各组小鼠心脏
                                                                正常对照组小鼠心肌纤维均匀致密、排列整齐，心
        组织0.5 mg，加入RIPA裂解液后研磨，于4 ℃下以12 000
                                                            肌间质蓝色胶原沉积少。模型组小鼠肌束纤维排列紊
        r/min离心15 min，取少量上清蛋白，采用BCA法测定蛋
                                                            乱，心肌间质蓝色胶原沉积明显，纤维化程度较重。与
        白含量，剩余蛋白加入Loading buffer并在100℃下变性                   模型组比较，PNU282987低、中、高剂量组和普萘洛尔组
        10 min，分装，于－80 ℃保存，备用。取变性蛋白适量，                      小鼠心肌间质蓝色胶原沉积均有所减少，心肌纤维化程
        经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，以湿法转移至 PVDF 膜                          度均有所降低，其中PNU282987高剂量组和普萘洛尔组
        上，用 5％脱脂牛奶室温封闭后，加入 JAK2、p-JAK2、                     改善更为明显，详见图1。
        STAT3、p-STAT3、GAPDH 一抗（JAK2 和 STAT3 的稀释             3.3 PNU282987对心脏重塑模型小鼠血清中LDH、CK
        比例为1 ∶ 200，p-JAK2和p-STAT3的稀释比例为1 ∶ 500，             含量的影响
        GAPDH的稀释比例为1 ∶ 5 000），室温孵育1～2 h后，于                      与正常对照组比较，模型组小鼠血清中LDH、CK含
        4 ℃过夜；用TBST溶液洗膜后，加入HRP标记的IgG二                       量均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，PNU282987
        抗（稀释比例为1 ∶ 5 000），室温孵育1 h；用TBST溶液洗                  高剂量组和普萘洛尔组小鼠血清中LDH以及PNU282987
        膜后，用 ECL 试剂显色，置于凝胶成像系统成像。使用                         中、高剂量组和普萘洛尔组小鼠血清中 CK 含量均显著
        Gel-Pro Analyzer 4.0 软件进行分析，以目标蛋白与内参                降低（P＜0.05或P＜0.01），而PNU282987低剂量组上述
        GAPDH 灰 度 值 的 比 值 评 价 目 标 蛋 白 表 达 水 平 ，以            指标均无明显变化（P＞0.05），详见表2。


        ·1248 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10                                 中国药房    2021年第32卷第10期
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