Page 65 - 《中国药房》2021年第6期

表1 PI3K、Akt、mTOR的引物序列及产物长度 表2 补骨脂素对PMOP模型大鼠股骨、椎骨骨密度的
3
Tab 1 PI3K，Akt，mTOR primer sequence and pro- 影响（x±±s，n＝10，g/cm）
duct length Tab 2 Effects of psoralen on BMD of femur and verte-
基因 引物序列（5′→3′） 产物长度，bp brae of PMOP model rats in each group（x±±s，
PI3K 上游：CAAAGCCGAGAACCTATTGC 220 n＝10，g/cm）
3
下游：TTGAGGGAGTCATTGTGCTG
组别 股骨 椎骨
Akt 上游：TGGACTACTTGCACTCCGAG 235 正常组 0.50±0.04 0.36±0.02
下游：CGCAGAACGTCTTCATGGTG
模型组 0.24±0.03 ＊＊ 0.18±0.03 ＊＊
mTOR 上游：TGGCTTCTAAGTCTACCACGACAG 221 补骨脂素低剂量组 0.30±0.05 0.32±0.01
下游：GAGGTCCIGACATTCCCTGATT
补骨脂素中剂量组 0.39±0.05 ## 0.46±0.01 ##
GAPDH 上游：TCCCTGTCAAGCAGTATCC 321 ##ΔΔ▲ ##ΔΔ
下游：TCCTCCTTGGCTTTGTCTC 补骨脂素高剂量组 0.51±0.04 0.53±0.04
阳性对照组 0.42±0.02 ##ΔΔ 0.54±0.01 ##ΔΔ
2.5 大鼠股骨组织中 PI3K、Akt、mTOR 蛋白表达的
##
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01；与补骨脂
＊＊
检测 素低剂量组比较，P＜0.01；与阳性对照组比较，P＜0.05
▲
ΔΔ
采用 Western blot 法进行检测。取大鼠股骨组织适 Note：vs. normal group， P＜0.01；vs. model group， P＜0.01；
##
＊ ＊
ΔΔ
▲
量，研磨后，用 RIPA 蛋白裂解液进行裂解，以 12 000 vs. psoralen low-dose group， P＜0.01；vs. positive control group，P＜
r/min离心12 min，取上清液，使用BCA蛋白含量检测试 0.05
剂盒测定蛋白浓度。取蛋白，煮沸 10 min 变性；取变性 与阳性对照组比较，补骨脂素高剂量组大鼠血清中钙离
后的蛋白适量，行 SDS-PAGE 后转膜，封闭 2 h，洗膜 5 子含量显著升高（P＜0.05），而骨钙素、P1NP 含量差异
min，分别加入山羊抗大鼠 PI3K、Akt、mTOR 一抗（稀 均无统计学意义（P＞0.05）。补骨脂素对 PMOP 模型大
释度均为 1 ∶ 1 000），于 4 ℃下孵育过夜；洗膜 5 min，加 鼠血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量的影响见表3。
入二抗（稀释度为1∶200），室温孵育1 h；以ECL显色，置 表3 补骨脂素对PMOP模型大鼠血清中钙离子、骨钙
于凝胶成像仪上成像并采用 Image J v1.5.1 软件处理分 素、P1NP含量的影响（x±±s，n＝10）
析，以目标蛋白与内参（GAPDH）蛋白条带的灰度值比 Tab 3 Effects of psoralen on serum contents of cal-
值作为目标蛋白的表达水平。 cium ion，osteocalcin and P1NP in PMOP
2.6 统计学方法 model rats（x±±s，n＝10）
采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。符合正 组别 钙离子，mmol/L 骨钙素，μg/mL P1NP，μg/mL
态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素 正常组 2.31±0.15 155.64±10.71 332.35±21.21
模型组 0.78±0.22 ＊＊ 113.26±13.50 ＊＊ 222.13±23.41 ＊＊
方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05表示
补骨脂素低剂量组 0.91±0.29 125.19±18.95 243.54±28.47
差异具有统计学意义。 补骨脂素中剂量组 1.34±0.45 # 136.12±17.64 # 313.42±22.35 #
3 结果 补骨脂素高剂量组 2.17±0.37 #Δ▲ 148.58±16.42 #Δ 273.76±26.56 #Δ
阳性对照组 1.89±0.32 #Δ 143.41±12.98 #Δ 279.63±25.36 #Δ
3.1 补骨脂素对 PMOP 模型大鼠股骨、椎骨骨密度的
#
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05；与补骨脂
＊＊
影响
素低剂量组比较，P＜0.05；与阳性对照组比较，P＜0.05
Δ
▲
与正常组比较，模型组大鼠股骨、椎骨骨密度均显
＊ ＊
Note：vs. normal group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05；
#
著降低（P＜0.01）。与模型组比较，补骨脂素中、高剂量 vs. psoralen low-dose group，P＜0.05；vs. positive control group， P＜
Δ
▲
组和阳性对照组大鼠股骨、椎骨骨密度均显著升高（P＜ 0.05
0.01）。与补骨脂素低剂量组比较，补骨脂素高剂量组和 3.3 补 骨 脂 素 对 PMOP 模 型 大 鼠 血 清 中 BMP2 和
阳性对照组大鼠股骨、椎骨骨密度均显著升高（P＜ VEGF水平的影响
0.01）。与阳性对照组比较，补骨脂素高剂量组大鼠股骨 与正常组比较，模型组大鼠血清中 BMP2 和 VEGF
骨密度显著升高（P＜0.05），而椎骨骨密度差异无统计 水平均显著降低（P＜0.01）。与模型组和补骨脂素低剂
学意义（P＞0.05）。补骨脂素对 PMOP 模型大鼠股骨、 量组比较，补骨脂素高剂量组和阳性对照组大鼠血清中
椎骨骨密度的影响见表2。 BMP2 和 VEGF 水平均显著升高（P＜0.05）。与阳性对
3.2 补骨脂素对 PMOP 模型大鼠血清中钙离子、骨钙 照组比较，补骨脂素高剂量组大鼠血清中BMP2水平显
素、P1NP含量的影响 著升高（P＜0.05），而 VEGF 水平差异无统计学意义
与正常组比较，模型组大鼠血清中钙离子、骨钙素、 （P＞0.05）。补骨脂素对 PMOP 模型大鼠血清中 BMP2
P1NP 含量均显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，补骨 和VEGF水平的影响见表4。
脂素中、高剂量组和阳性对照组大鼠血清中钙离子、骨 3.4 补骨脂素对 PMOP 模型大鼠股骨组织中 PI3K、
钙素、P1NP 含量均显著升高（P＜0.05）。与补骨脂素低 Akt、mTOR mRNA表达的影响
剂量组比较，补骨脂素高剂量组和阳性对照组大鼠血清 与正常组比较，模型组大鼠股骨组织中 PI3K、Akt、
中钙离子、骨钙素、P1NP 含量均显著升高（P＜0.05）。 mTOR mRNA 的表达水平均显著升高（P＜0.01）。与模

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