Page 108 - 《中国药房》2021年第4期

吸取全部上清液；合并两次上清液，置于40 ℃水浴中以 5-FUH2质控样品溶液，每个质量浓度各取5份，分别于1
氮气流吹干，残渣加流动相 100 μL 复溶，涡旋 2 min，经 d内按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱
0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，置于自动进样瓶中备测。 条件连续进样分析，考察日内精密度；连续3 d按“2.3”项
2.4 专属性考察 下方法处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分
分别取空白血浆、空白血浆+5-FU+5-FUH2+内标、 析，考察日间精密度。以实测质量浓度与理论质量浓度
晚期结直肠癌患者血浆样品+内标，按“2.3”项下方法处 进行比较，用相对误差（RE）来考察准确度。结果，5-FU
理后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，记录色 和5-FUH2日内、日间精密度均小于20％，RE在±10％范
谱图。结果，5-FU、5-FUH2、5-Bru 的保留时间分别为 围内，符合体内生物样品定量分析的要求 ，详见表1。
[11]
1.22、1.18、1.55 min；空白血浆中的内源性物质（如自身 表1 不同质量浓度5-FU、5-FUH2质控样品的精密度与
体内的神经递质、激素等）对 5-FU、5-FUH2的测定无干 准确度试验结果
扰，色谱峰峰形对称、特异性好，分离度均大于＞1.5，详 Tab 1 Results of precision and accuracy tests of dif-
见图1（空白血浆图略）。 ferent dehermination of 5-FU，5-FUH2 sample
100 5-FUH2+5-FU 5-Bru 精密度
0 待测成分 理论质量浓度， 实测质量浓度（x±s）， RE，
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 ng/mL ng/mL ％ 日内（n＝5），％ 日间（n＝3），％
％ 100 0 5-FU 5-FU 20 20.55±3.76 2.75 17.10 18.31
相对强度， 100 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 5-FUH2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 50 46.86±6.75 －6.28 9.78 14.40
1.2
0
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 400 404.65±49.07 1.16 5.76 12.13
822.69±66.92
800
8.13
4.76
2.84
100 5-Bru 20 19.79±3.77 －1.05 18.28 19.05
0 5-FUH2
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 50 54.04±7.04 8.08 11.68 13.03
时间，min 400 401.03±52.32 0.26 9.84 13.05
A.空白血浆+5-FU（800 ng/mL）+5-FUH2 （800 ng/mL）+内标
800 819.06±62.98 2.38 5.34 7.69
5-FUH2+5-FU
100 5-Bru
0 2.7 稳定性试验
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8
5-FU 分 别 取“2.2.3”项 下 50、400、800 ng/mL 的 5-FU、
100
％ 0 5-FUH2质控样品溶液，每个质量浓度各取5份，分别于室
相对强度， 100 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 5-FUH2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 温下放置 24 h、低温（4 ℃）下放置24 h、－80 ℃冷冻保存
1.2
0
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8
100 5-Bru 30 d、3次冻融循环（－20 ℃～室温）、在自动进样器中放置
0 24 h后，按“2.3”项下方法处理，再按“2.1”项下色谱与质谱
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8
时间，min 条件进样分析，记录峰面积。以实测质量浓度与理论质量
B.晚期结直肠癌患者血浆样品
图1 不同血浆样品的UPLC-MS/MS色谱图 浓度进行比较，用RE来考察稳定性。结果，RE在±7％范
Fig 1 UPLC-MS/MS chromatograms of different 围内，提示样品在上述条件下稳定性良好详见表2。
plasma samples 2.8 提取回收率和基质效应考察
取“2.2.3”项下50、400、800 ng/mL的5-FU质控样品
2.5 线性关系考察
溶液，每个质量浓度各取5份，按“2.3”项下方法处理后，
分别取“2.2.1”项下 5-FU、5-FUH2对照品溶液适量，
加 50％甲醇稀释，制成质量浓度分别为 100、250、500、 再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，测得 5-FU 质
控样品/5-Bru峰面积的比值（A）；另取空白血浆适量，按
1 000、2 000、2 500、3 750、5 000 ng/mL 的 5-FU、5-FUH2
系列溶液。分别精密吸取上述系列溶液各 40 μL，加 “2.3”项下方法处理后，取上清液适量，加5-FU对照品溶
“2.2.2”项下内标溶液 20 μL，于 40 ℃下以氮气流吹干 液适量，制成质量浓度分别为50、400、800 ng/mL的对照
后，残渣加空白血浆 200 μL，制成质量浓度分别为 20、 品样品，每个质量浓度各取 5 份，按“2.1”项下色谱与质
谱条件进样分析，测得5-FU对照品样品/5-Bru峰面积比
50、100、200、400、500、750、1 000 ng/mL的5-FU、5-FUH2
系列单一线性工作溶液，按“2.3”项下方法处理后，再按 值（B）；按“2.2.3”项下方法，将空白血浆改为50％甲醇制
“2.1”项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积。以待 成质量浓度为分别为50、400、800 ng/mL的5-FU甲醇样
测成分的质量浓度（X，ng/mL）为横坐标、待测成分与内 品，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱
标的峰面积比值（Y）为纵坐标进行线性回归，得5-FU的回 条件进样分析，测得 5-FU 甲醇样品/5-Bru 峰面积比值
归方程为Y＝0.014 4X－0.065 4（R ＝0.998 7）、5-FUH2的 （C）。 提 取 回 收 率 ＝A/B × 100％ ，基 质 效 应 ＝B/C ×
2
回归方程为 Y＝0.002 1X－0.010 3（R ＝0.996 1），表明 100％。5-FUH2按上述同法操作。结果，5-FU的平均提
2
5-FU、5-FUH2检测质量浓度的线性范围均为 20～1 000 取回收率为 52.93％～58.89％（RSD≤5.89％），平均基
ng/mL，定量下限均为20 ng/mL。 质效应为 99.40％～102.31％（RSD≤7.65％）；5-FUH2的
2.6 精密度与准确度试验 平均提取回收率为 54.60％～62.01％（RSD≤8.08％），
分别取“2.2.3”项下 20、50、400、800 ng/mL 的 5-FU、 平均基质效应为 97.21％～101.87％（RSD≤7.57％），均

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