Page 107 - 《中国药房》2021年第4期
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氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）可同时抑制肿瘤细              震荡器（德国 WIGGENS 公司），D-35720 型低温高速离
        胞 DNA 和 RNA 的合成，是晚期结直肠癌患者化疗的基                      心机（美国Thermo Fisher Scientific公司），EX324型十万
        石 [1－3] 。其作为抗代谢类细胞毒性药物，治疗窗相对较                      分 之 一 电 子 天 平 [ 奥 豪 斯 仪 器（上 海）有 限 公 司]，
        窄，能在浓度暴露水平重叠的情况下发挥疗效并产生毒                           JT-DCY-12SL型水浴氮吹仪（杭州聚同电子有限公司）。
          [4]
        性 。在临床应用中，5-FU 和卡培他滨、奥沙利铂等化                        1.2 主要药品与试剂
        疗药物相似，其给药剂量均根据患者的体表面积（BSA）                             实验所用主要药品与试剂有：5-FU 对照品（上海麦
        确定。但有研究发现，基于BSA给药时，5-FU体内清除                        克林生化科技有限公司，批号 F100149，纯度 99％）、
                                               [5]
        率存在较大的个体差异，差异高达10～100倍 。目前，                        5-FUH2对照品（美国Cayman公司，批号0496883-6，纯度
        5-FU 的治疗药物监测（TDM）研究发现，药动学参数药-                      99％）、5-溴尿嘧啶对照品（5-Bru，内标，美国 Sigma-Al-
        时曲线下面积（AUC）与疗效和安全性具有相关性，在                          drich公司，批号852473，纯度98％）等；人空白血浆由哈
        5-FU持续静脉滴注的方案中，5-FU AUC可以用5-FU稳                    尔滨医科大学附属肿瘤医院提供；甲醇、乙腈、甲酸均为
        态血药浓度（css ）和持续静脉滴注时间（TCI）的乘积来计                     质谱级，乙酸乙酯为色谱纯，水为去离子水。
          [4]
        算 。由此，笔者认为基于 5-FU 的 AUC 来调整其临床                     2 方法与结果
        剂量是可行的。                                            2.1 色谱与质谱条件
            二氢嘧啶脱氢酶（DPD）可清除体内 80％～90％的                     2.1.1  色谱条件      以 Acquity UPLC HSS T3 （100 mm×
                                            [4]
        5-FU，是该药体内分解代谢的关键限速酶 。有研究表                         2.1 mm，1.8 μm）为色谱柱，以甲醇-水（30 ∶ 70，V/V）为流
        明，一般人群中，DPD 酶活性偏低和完全缺乏者分别占                         动相，流速为0.3 mL/min，柱温为20 ℃，进样量为5 μL。
        全部人群的3％～5％和0～0.1％，DPD酶活性偏低或缺                       2.1.2  质谱条件      离子源为电喷雾离子源（ESI），扫描
        乏会造成患者体内 5-FU 血药浓度升高而致蓄积中毒，                        模式为多反应监测（MRM）模式，扫描方式为负离子模
        从而引发严重的骨髓抑制和胃肠道反应等，因此DPD酶                          式，毛细管电压为1.5 kV，锥孔电压为20 V，脱溶剂温度
        活性是预测 5-FU 相关不良反应的生物标志物之一                   [4－6] 。  为450 ℃，脱溶剂气流为850 L/h，锥孔气流速为50 L/h；
        DPD 酶由 DPYD 基因编码，目前除检测患者 DPYD 基因                   用 于 定 量 分 析 的 离 子 对 分 别 为 m/z 129.00→41.90
        多态性外，还可将二氢尿嘧啶（UH2 ）/尿嘧啶（U）浓度比                      （5-FU）、m/z 130.87→82.92（5-FUH2 ）、m/z 189.00→42.10
        值或5-氟-5，6-二氢尿嘧啶（5-FUH2 ）/5-FU浓度比值作为                （5-Bru）。
        DPD 酶活性的表型指标 。5-FUH2 是 5-FU 在体内经                   2.2  溶液的制备
                              [4]
        DPD 酶分解产生的主要代谢产物，已有研究证实，                           2.2.1  对照品溶液       精密称取 5-FU、5-FUH2对照品各
        5-FUH2 的血药浓度与 5-FU 引起的不良反应具有相关                     10.00 mg，分别置于 100 mL 棕色量瓶中，加 50％甲醇定
        性 [7－8] 。因此，测定5-FU和5-FUH2血药浓度既可用于计                 容，混匀，制成 5-FU、5-FUH2质量浓度均为 100 mg/L 的
        算5-FU的AUC，又可用于评估DPD酶活性。                            单一对照品贮备液。精密吸取上述各单一对照品贮备
            目前，5-FU TDM 的常用方法包括高效液相色谱法                     液适量，分别加 50％甲醇稀释，制成 5-FU、5-FUH2质量
       （HPLC）、液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）和免疫分                     浓度均为 10 mg/L 的单一对照品溶液，置于 4 ℃冰箱中
        析法，其中 HPLC 法和 LC-MS/MS 法是测定 5-FU 血药                保存，备用。
        浓度的经典方法，准确度、灵敏度较高，但分析速度较                           2.2.2  内标溶液      精密称取 5-Bru 对照品 10.00 mg，置
        慢 [9－10] 。超高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）               于 100 mL 棕色量瓶中，加 50％甲醇定容，混匀，制成质
        具有较高的准确度和灵敏度，且分析时间较短，更适合                           量浓度为100 mg/L的5-Bru贮备液。精密吸取上述贮备
                            [4]
        于临床样本的批量检测 。基于此，本研究建立了同时                           液适量，加50％甲醇稀释，制成质量浓度为2 000 ng/mL
        测定人血浆中 5-FU 和 5-FUH2浓度的 UPLC-MS/MS 法；              的内标溶液，置于4 ℃冰箱中保存，备用。
        同时，采用该方法对哈尔滨医科大学附属肿瘤医院使用                           2.2.3  质控样品溶液        取“2.2.1”项下 5-FU、5-FUH2单
        以5-FU为基础化疗方案的晚期结直肠癌患者的5-FU和                        一对照品溶液适量，分别加空白血浆稀释，制成质量浓
        5-FUH2血药浓度进行检测，并计算5-FU的AUC，旨在为                     度分别为20、50、400、800 ng/mL的5-FU、5-FUH2质控样
        调整下一周期5-FU的化疗剂量调整以及患者的个体化                          品溶液。
        用药提供参考。                                            2.3 血浆样品的处理
        1 材料                                                   取空白血浆适量，置于37 ℃水浴中融解，精密吸取
        1.1 主要仪器                                           200 μL，置于 1.5 mL 离心管中，加“2.2.2”项下内标溶液
            实验所用主要仪器有：Waters ACQUITY H-Class型              25 μL，涡旋30 s，混匀，加乙酸乙酯1 mL，涡旋1 min；于
        UPLC 仪（配有 UPLC 系统和质谱检测器）、Waters Xevo               4 ℃下以 14 600 r/min 离心 10 min，吸取上清液 500 μL，
        TQ-MS 检测器（美国 Waters 公司），TI-H20 型多频超声               置于另一1.5 mL 离心管中；在原离心管中再加乙酸乙酯
        波清洗仪（德国 ELMA 公司），BS14-TM-1F 型数显涡旋                  500 μL，涡旋30 s，于4 ℃下以14 600 r/min离心10 min，


        中国药房    2021年第32卷第4期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4  ·481 ·
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